马耳它布氏杆菌bp26基因缺失株的构建及鉴定

为了建立马耳他布氏杆菌M5-90株弱毒疫苗株与野生株的鉴别诊断,本研究以bp26基因作为重组靶位点,以M5-90为亲本,利用bp26基因ORF外侧序列作为同源序列,将卡那霉素抗性基因(Kan')整合到细菌基因组中,双交叉重组阳性菌株,经SDS-PAGE和western blot试验表明迁移率约为29 ku的BP26蛋白在亲本菌中表达并可被鼠抗BP26高免血清识别,而突变株M5-90-26反应结果为阴性,表明BP26蛋白在突变疫苗株M5-90-26中未表达.M5-90-26具备从血清学角度区分M5-90-26免疫与野生型布氏杆菌感染,对布氏杆菌病防制、监测及净化具有重要的意义.     

禽流感（H9）灭活疫苗白油佐剂的优选试验

采用同一批病毒原液，不同白油佐剂乳化的疫苗，对7日龄肉鸡分组免疫接种，观察并对比各组鸡群的精神状态、采食量、增重、料肉比、疫苗的吸收情况和抗体变化规律，根据以上数据，综合评价佐剂的性能。结果显示，a疫苗中白油佐剂对鸡群影响较小，增重高于其他各组，疫苗吸收速度快，注射省力，抗体水平优秀，确定为最佳白油佐剂。     

光滑型布鲁氏菌LPS单克隆抗体的制备及鉴定

为制备抗布鲁氏菌单克隆抗体(MAb),本研究用灭活的布鲁氏菌疫苗M5-90株免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术获得杂交瘤细胞.以布氏杆菌疫苗株M5-90、S-19及小肠结肠炎耶尔森菌0:9的脂多糖(LPS)分别作为抗原包被酶标板,对杂交瘤细胞进行筛选,获得两株稳定分泌抗光滑型布氏杆菌LPS(S-LPS)MAb的细胞4G6和16C5.特异性分析表明,MAb 4G6除与耶尔森0:9全菌体有轻微的交叉反应外与其它革兰氏阴性菌无交叉,而16C5完全排除了与其他各菌的交叉反应.Ig亚型分析表明,所制备MAb的轻链亚类均为κ,4G6重链为IgM.16C5重链为IgG3.用Protein G亲和层析纯化MAb 16C5腹水并初步用于竞争ELISA方法,检测布氏杆菌抗体水平,结果表明了该实验方法的有效性.本研究制备的MAb 16C5具有高度的特异性和敏感性,排除了与其他革兰氏阴性菌的交叉反应,为建立一种诊断布鲁氏病的快速、有效、敏感的方法奠定了有力的基础.     

流产布氏杆菌S19突变株构建及在小鼠感染模型中的免疫保护评估

通过构建标记疫苗株来解决流产布氏杆菌(B.abortus)鉴别诊断方面的缺陷,本研究以bp26基因作为重组靶住点,S19为亲本,利用bp26基因ORF外侧序列作为同源重组序列,卡那霉素抗性基因(Kanr)为抗性筛选标记,通过双交叉重组筛选获得bp26基因缺失突变的重组S19株,命名为S19-△26.小鼠感染结果表明,突变株S19-△26的残留毒力与亲本株S19相比较没有发生明显改变,康复时间约为15周,突变株S19-△26、亲本株S19和B.abortus强毒株S544接种小鼠后的第3周能检测出"O"抗原的特异性抗体,而第6周开始S19和S544接种小鼠BP26特异性抗体明显升高,S19-△26接种的小鼠一直没检测到BP26特异性抗体.小鼠免疫保护试验显示,脾脏分离CFU数比空白对照要低310g10,S544攻击后脾脏细菌分离数表明突变株具有与亲本疫苗株免疫保护性无明显差异.结果表明,S19-△26免疫能够通过血清学方法与野生型B.abortus感染后的免疫反应相区别,具备作为标记疫苗的潜力.