广西“猪高热综合征”主要病原调查及PRRSVNsp2基因变异分析

收集广西境内39个市(县)137个不同规模猪场及农村散养户146份病料,经检测发现广西"猪高热综合征"主要病原以PRRSV变异株(NSP2基因缺失)为主,检出率高达59.59%,其次为PCA占41.78%,CSFV占4041%,SIV占10.27%,PRV、HPS均占2.05%.将来自广西不同地区的15株PRRSV变异株(包括1株经典株)与国内外参考毒株部分Nsp2序列进行同源性比较,结果发现广西PRRSV变异株Nsp2序列之间同源性为83.3%～100%,与国内其他变异株同源性为83.2%～98.6%.这些毒株与国内其他变异株有完全一致的缺失特征.广西PRRSV变异株可分为2个亚群,亚群Ⅰ主要以桂西北地区毒株组成,亚群Ⅱ主要以桂东南地区毒株组成.所有的广西PRRSV流行株与国内其他毒株一样均属于美洲型.调查结果显示,广西"猪高热综合征"主要病原PRRSV变异株与PCV、CSFV等其他病原菌混合感染十分严重.其中,二重感染、三重感染分别高达42.53%和22.99%.     

狂犬病毒G基因主要抗原表位区（Rmg）的表达及纯化

【目的】对狂犬病毒Rmg基因进行克隆、表达、纯化及复性,以期获得表达量高、反应原性好的Rmg蛋白,为研制快速、直观、简便检测狂犬病毒抗体的胶体金试纸条奠定基础。【方法】用常规PCR从狂犬病毒基因组中克隆出狂犬病毒G蛋白的主要抗原表位基因Rmg,并将其插入原核表达载体pET-Trx中,构建原核表达质粒pET-Trx-Rmg,将pET-Trx-Rmg转化BL21（DE3）plysS,在IPTG诱导下进行表达。【结果】SDS-PAGE分析结果表明,Rmg基因在BL21（DE3）plysS中获得高效表达,表达量占菌体总蛋白的30.5%左右,并主要以不溶的包涵体形式存在,分子量约为51.7 kDa。将表达的蛋白以亲和层析法进行纯化并通过谷胱甘肽还原法进行复性,纯化后蛋白纯度达99.1%。经Western blotting检测,发现表达的Rmg蛋白能够与狂犬病毒高免血清发生特异反应,但与犬细小病毒（CPV）、犬瘟热病毒（CDV）阳性血清不发生反应。【结论】Rmg蛋白具有良好的抗原性,可用于研制检测狂犬病毒抗体的胶体金试纸条。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H-PRRSV)Nsp2基因的变异监测

收集2006 ～2010年来自广西12个地市的21份高致病性猪繁殖与呼吸综合征(H-PRRSV)阳性病料,克隆包含缺失区的Nsp2基因片段并登陆Genbank(登录号为HQ015350-HQ015370),经序列比较发现,该21株Nsp2序列具有与我国2006年爆发的H -PRRSV完全一致的缺失特征,广西H-PRRSV流行毒株Nsp2基因随着流行时间的推移朝着偏离猪高致病性蓝耳病代表毒株JXA1株的方向发展,在遗传进化树上呈地城性分布.此外,广西H-PRRSV毒株氨基酸逐渐发生变异,特别是2010年来源于3个不同地方的3个毒株5个位点均发生突变,即P19L、R33Q、R34F、,S431、E107K,这些位点的突变导致二级结构、亲水性、抗原指数和暴霉区域发生了变化.     

狂犬病毒G基因主要抗原表位区（Rmg）的表达及纯化

【目的】对狂犬病毒Rmg基因进行克隆、表达、纯化及复性,以期获得表达量高、反应原性好的Rmg蛋白,为研制快速、直观、简便检测狂犬病毒抗体的胶体金试纸条奠定基础。【方法】用常规PCR从狂犬病毒基因组中克隆出狂犬病毒G蛋白的主要抗原表位基因Rmg,并将其插入原核表达载体pET-Trx中,构建原核表达质粒pET-Trx-Rmg,将pET-Trx-Rmg转化BL21（DE3）plysS,在IPTG诱导下进行表达。【结果】SDS-PAGE分析结果表明,Rmg基因在BL21（DE3）plysS中获得高效表达,表达量占菌体总蛋白的30.5%左右,并主要以不溶的包涵体形式存在,分子量约为51.7kDa。将表达的蛋白以亲和层析法进行纯化并通过谷胱甘肽还原法进行复性,纯化后蛋白纯度达99.1%。经Western blotting检测,发现表达的Rmg蛋白能够与狂犬病毒高免血清发生特异反应,但与犬细小病毒（CPV）、犬瘟热病毒（CDV）阳性血清不发生反应。【结论】Rmg蛋白具有良好的抗原性,可用于研制检测狂犬病毒抗体的胶体金试纸条。     

石龟嗜水气单孢菌的分离鉴定及药敏特性研究

从患病石龟上分离获得1株革兰氏阴性杆菌,菌体细长、无芽孢和荚膜,在山羊血琼脂平板上能形成明显的β-溶血圈。经小白鼠致病性试验、生理生化鉴定及16SrRNA序列分析,确定该分离株为致病性嗜水气单孢菌。经同源性及遗传进化分析发现,该菌株与嗜水气单孢菌B27、HSO2（Genbank登录号：FJ494900．1、FJ562211．1）同源性高达99．5％。而药敏试验表明,该分离株除了对赛福欣（复方恩诺沙星）、肠清（复方乳酸环丙沙星）2种药物高度敏感外,对大部分抗菌素均不敏感。     

广西猪伪狂犬病的流行监测及防控工作重点

为调查猪伪狂犬病（PR）目前在广西的流行情况,于2006～2008年对广西13个市122个不同规模猪场进行流行病学调查,并对163份病料及61份血清进行检测。结果显示,163份病料经PCR检测出阳性病料6份,阳性率为3．7％;对6株广西PRV gE胞外基因进行克隆测序比较及遗传进化分析发现,广西PRV毒株变异不大,6株广西PRVgE基因与国内外其他毒株之间核苷酸序列同源性均很高,介于96．4％～100．0％之间,氨基酸同源性为93．6％～100．0％,亲缘关系较为密切,应为同一毒株遗传进化而来;61份血清经gE—ELISA检测出阳性血清7份,阳性率11．5％,表明部分猪场存在PRV隐眭感染。调查结果肯定了广西在PR防控工作中取得的成绩,提出做好免疫、加强监测、淘汰隐性感染猪、提高猪体免疫力、净化种猪群是今后PR防控工作的重点。     

我国犬瘟热病毒的生态学调查研究

本研究应用电子显微镜技术检查了１７个毛皮动物和野生动物的６７６份材料,从犬,貂,貉,狐熊,小熊猫,大熊猫,狼,狮,虎,猞狮、金猫等１２种动物病料中,检出含有ＣＤＶ材料４８７份。应用间接ＥＬＩＳＡ、免疫荧光和中和试验等技术检测了８种动物１５８份血清,其中从犬,狐,小熊猫、虎、金猫,狼等６种动物的１０６份血清中检出了抗ＣＤＶ抗体。应用ＲＴ－ＰＣＲ和基因探针检查了４种动物的３７份材料,其中有２９份阳性。     

介绍一种快速提取免疫球蛋白G的方法

介绍一种快速提取免疫球蛋白Ｇ的方法吴健敏，袁书智，贺荣莲广西区兽医研究所５３０００１目前，提取免疫球蛋白Ｇ（ＩｇＧ）常用的方法有饱和硫酸按盐析法、离子交换层析法、凝胶过滤法、亲和层析法等，这些方法往往操作繁琐、费时费力，对ＩｇＧ活性影响较大。现介绍一...     

某规模化猪场猪瘟抗体水平及其野毒感染的检测与分析

为了解某规模化猪场后备种猪群猪瘟野毒感染情况和猪瘟抗体免疫状况,研究分别采用荧光抗体技术和阻断ELISA方法对该场825份猪扁桃体样品和825份血清样品进行了猪瘟病毒和猪瘟抗体检测。结果表明:猪瘟病毒阳性率为2.06%(17/825),猪瘟抗体阳性率为86.06%(710/825),抗体离散度为33.02%。说明该场后备种猪群的猪瘟免疫情况较理想,猪瘟病毒阳性率较低,并且猪瘟抗体免疫合格率较高,但抗体离散度偏高。分析猪瘟抗体水平和感染猪瘟野毒之间的相互关系可知,无论猪瘟免疫抗体水平是否合格,均有可能感染猪瘟野毒,但感染率随着猪瘟抗体阻断率的升高而逐渐降低。