FMDV OA/58病毒株VP1蛋白结构构建与B细胞抗原表位的预测

以口蹄疫病毒株OA/58 RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoR Ⅰ酶切法鉴定.运用同源模建得到OA/58 VP1蛋白3D结构,并结合理化性质、亲水性、可塑性和免疫原性进行分析,预测OA/58 VP1的抗原表位.结果 OA/58 VP1存在多个潜在的抗原表位位点,可能的蛋白质抗原表位区域:2～11,15～35,38～50,77～88,90～107,121～125,131～135,140～149,154～163,169～175,178～189,197～213.应用同源模建得到的OA/58 VP1蛋白3D模型来预测其B细胞表位,为进一步研究OA/58 VP1功能,构建突变体和选择表达新型OA/58 VP1蛋白分子提供有参考价值的信息.     

口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白αvβ6的细胞定位及组织分布

利用pcDNA3.1（＋）-β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞,间接免疫荧光法（IFA）检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法（IHA）检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的单克隆抗体作为一抗,FITC标记山羊抗小鼠IgG、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG分别作为二抗。结果表明,pcDNA3.1（＋）-β6p真核表达载体稳定转染的CHOK1细胞的细胞膜及细胞质内可见致密的绿色荧光（IFA）,猪舌、唇、气管等组织细胞的细胞膜及细胞质内均出现了棕黄色的特异阳性反应物,表明整联蛋白αvβ6受体广泛分布于猪体的器官组织细胞中,为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定了基础。     

FMDV OA/58病毒株VP3蛋白结构的模拟与分析

以口蹄疫病毒株OA／58 RNA为模板，反转录并扩增目的cDNA，然后与pMD18-T载体连接并转化JM109菌株，提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和BarnHⅠ、HindⅢ双酶切法鉴定。分析表明，口蹄疫病毒VP1、VP2、VP3和VP4在核苷酸水平上的变异率是无差异的（P〉0．05）；而它们在氨基酸水平上的变异率差异显著（P〈0．05）。该毒株与20株源于GenBank中的VP3氨基酸序列比较发现其保守区主要位于第1～24、26～35、37～43、45～57、61～122、124～173、175～209、211～220位。运用同源模建，OA／58 VP3蛋白三维空间结构可分为A，B，C3个结构区域。保守区氨基酸残基在维持VP3蛋白的空间构象和功能方面具有重要作用。     

鸡新城疫——减蛋综合征二联油佐剂疫苗的研制

应用鸡新城疫（ＮＤ）ＬａＳｏｔａ株和减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）ＬＡ３株,分别接种鸡胚和鸭胚增殖病毒,血凝价分别达≥１：１２８０和≥１：１００００时,收取病毒,经福尔马林灭活,按一定比例加入吐温－８０、油佐剂制成ＮＤ－ＥＤＳ－７６二联疫苗,经无菌检验、安全性试验、剂量选择、保护性试验、免疫效果和免疫期测定及保存期观察,结果表明：该二联苗安全性好,于蛋鸡开产前１月皮下注射１ｍＬ／只,２５ｄ后ＮＤ和ＥＤＳ－７６抗体可先后达到高峰,免疫期１年。保存期４℃为１年,２０℃为３个月。     

非洲猪瘟诊断技术研究进展

非洲猪瘟是猪的一种急性、高度接触性传染病,致死率可达100%。本文综述了非洲猪瘟病原学和血清学诊断技术研究进展,包括红细胞吸附试验(HAD)、聚合酶链反应技术(PCR)、环介导恒温扩增技术(LAMP)、荧光抗体技术(FAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和胶体金快速免疫层析技术(GICA)等,并对各种方法的优缺点进行简要汇总分析,总结认为今后非洲猪瘟诊断的发展趋势在于不同诊断技术的联合应用。     

口蹄疫病毒2c基因的克隆及表达

从O型口蹄疫病毒China98株病毒材料中克隆到了非结构蛋白2C的基因，并成功地将该基因在大杆菌中进行了表达，为建立以基因工程产品为抗原，能区分人工免疫和自然感染动物的检疫方法提供也技术和材料条件。 sri     

H5N1亚型禽流感病毒起源及演化关系的探讨

通过综述感染人类的H5N1亚型高致病性禽流感病毒起源及演化关系,表明感染人的A/Hongkong/97(H5N1)株及目前流行的高致病性禽流感病毒可能起源于禽源的A型流感病毒株(A/Goose/Guangdong/1/96)。自1996年以来,H5N1亚型禽流感病毒的基因型经Gs/Gd,A,B,C,D,E,V,W,X0-X3,Y,Z和Z 不断的演化为目前流行的基因型Z。高致病性禽流感病毒(H5,H7和H9亚型)在禽,特别是水禽体内的重组或重配而相互传播,并随候鸟的迁徙而传播不易消灭,H5N1亚型的禽流感在不同地区的不断暴发与流行已严重威胁着养禽业的发展及人类的健康,需要进行长期监控。     

Asia Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因和牛α-干扰素基因的融合表达

将Asia Ⅰ型口蹄疫病毒YNBS／58株VP1基因和去信号肽的牛α-干扰素基因共同亚克隆于原核表达载体pET-28a中，转化BL21后经IPTG诱导，实现了重组融合蛋白VP1-BoIFN—α-在大肠埃希氏茵BL21中的高效表达，表达产物经SDS—PAGE和western-blotting分析，重组的VP1-BoIFN—α蛋白分子质量约为46ku，与预期大小相符。薄层扫描分析显示，重组蛋白VP1-BoIFN—α的表达量占茵体总蛋白的30％，且以包涵体的形式存在。包涵体提取物用8mol／L尿素溶解后，在变性条件下利用Ni—NTA柱对VP1-BoIFN—α-融合蛋白进行了纯化。