广西地区犬细小病毒检测及VP2基因序列分析

为了调查广西地区犬细小病毒(CPV)的优势毒株及其遗传变异情况,试验利用PCR方法对采自广西地区的423份犬血清样本进行CPV检测并扩增其VP2基因,利用MegAlign软件进行同源性比对并分析VP2蛋白主要突变的氨基酸位点,同时利用MEGA 7.0软件采用邻接法构建遗传进化树。结果表明：共获得55份CPV阳性血清样本,阳性率约为13.0%。PCR扩增得到大小约为1 755 bp的VP2基因。55株分离毒株之间的相似性为98.6%～100%;分离毒株与国内外参考毒株的相似性为97.4%～100%,与疫苗株Pfizer/vaccine/06的相似性为98.3%～98.9%。扩增序列的推导氨基酸主要在第5,297,370,426,440位发生变异。在55株分离毒株中,有32株为New CPV-2a亚型毒株,20株为CPV-2c亚型毒株,3株为New CPV-2b亚型毒株。55株分离毒株形成3个主要的流行分支,与国内参考毒株的亲缘关系较近,而与国外参考毒株、猫细小病毒的亲缘关系较远。说明New CPV-2a、CPV-2c、New CPV-2b亚型毒株在广西地区流行广泛,正逐步取代CPV-2a...     

猪圆环病毒4型实时荧光RAA检测方法的建立

为快速检测猪圆环病毒4型(PCV4),本研究根据PCV4的Cap基因片段保守区设计引物和探针,建立了PCV4重组酶介导核酸等温扩增荧光法(RAA),并应用该方法对40份猪组织样品进行检测。结果表明,该方法可在20 min内,42℃恒温条件下特异性检测出PCV4,以猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病毒核酸为模板进行反应的扩增结果均为阴性;最低检出限至7.42×10¹拷贝/μL,灵敏度较高。利用建立的RAA检测方法和常规PCR法分别对猪组织样本进行检测,均未检出,表明当前猪场流行率较低。综上所述,本研究建立的PCV4实时荧光RAA检测方法快速简便、特异性强、灵敏度较高,可应用于PCV4的临床筛查与流行病学研究。     

四种牛结节性皮肤病抗体ELISA检测试剂盒的比对

为筛选可靠的牛结节性皮肤病免疫抗体评价方法,以已知牛结节性皮肤病感染牛血清17份、羊痘疫苗免疫牛/羊血清77份和阴性牛血清20份作为样品盘,以病毒中和试验结果作为金标准,通过Kappa一致性和诊断效能评价,分别对市售的4种牛结节性皮肤病/羊痘抗体ELISA检测试剂盒进行分析比对。结果显示:4种ELISA检测试剂盒特异性为87.5%～94.34%,敏感性均不足80%,其中2种试剂盒与病毒中和试验的符合率超过80%,一致性为高度。结果表明,在临床应用中应根据检测目的选用可靠的试剂盒。本研究为科学有效防控牛结节性皮肤病提供了技术支持。     

鉴别牛结节性皮肤病病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为实现牛结节性皮肤病病毒（LSDV）和羊痘病毒属（CaPV）其他成员的鉴别诊断，针对LSDV 010基因保守区域设计特异性引物及Taq Man探针，与文献报道的CaPV 068基因的通用引物及探针组合，通过优化反应体系和条件，建立了一种可同时鉴别检测LSDV和CaPV其他成员的双重荧光定量PCR检测方法。结果显示：本方法可以特异性扩增LSDV和CaPV其他成员，并且与其他牛、羊病毒无交叉反应，特异性好；对pLSDV-010和pCaPV-068质粒标准品的最低检测限均为15 copies/μL，具有较高的灵敏性；组内和组间变异系数均小于1.75%，重复性良好。应用本试验建立的方法与荧光定量PCR方法同时检测542份临床样品，发现CaPV的样品符合率为98.52%,LSDV为99.63%。本试验建立的方法为CaPV鉴别筛查、LSDV精准防控及流行病学调查提供了快捷有效的技术手段。