顶复门原虫钙依赖蛋白激酶的研究进展

钙依赖蛋白激酶(Calcium-dependent protein kinases,CDPKs)是一类大的蛋白激酶家族,属于丝氨酸/苏氨酸类蛋白激酶,广泛存在于各种植物和原生动物中,参与多种生命活动的调控.随着生物信息学、分子生物学及基因工程的迅速发展,对顶复门原虫CDPKs的研究日益增多.研究结果表明,这类蛋白家族成员参与调控寄生虫入侵、外出宿主细胞、配子形成、宿主体内移行等顶复门原虫生活史的多个重要时期,其特殊的分子结构或可成为研究抗寄生虫疫苗或药物的候选靶标.本文以疟原虫、弓形虫和艾美耳球虫CDPKs为重点,综述了顶复门原虫CDPKs的结构、功能及生物学意义,展望了顶复门原虫CDPKs的研究和应用前景,以期为研究顶复门原虫的致病机理及研发抗原虫生物制剂提供参考.     

弓形虫MORN2基因敲除株的构建及其表型鉴定

本研究旨在构建弓形虫(Toxoplasma gondii)Ⅰ型RH虫株的膜占位与识别联结蛋白2(membrane occupation and recognition nexus protein,MORN2)基因敲除株,探究MORN2基因的表型功能。利用CRISPR/Cas9技术在sgRNA设计网站筛选出以MORN2基因为靶标的sgRNA并设计引物,以pSAG1∷CAS9-U6∷sgUPRT质粒为模板,在Q5酶作用下构建出MORN2靶向CRISPR的质粒;在MORN2靶点两翼约500bp设计同源臂引物,以pUPRT∷DHFR-D质粒为模板构建含有乙胺嘧啶药物抗性基因(DHFR)的同源片段;将CRISPR质粒与同源片段电转染到弓形虫速殖子中,进行乙胺嘧啶药物筛选、96孔板单克隆筛选及PCR鉴定。结果显示,试验成功获得MORN2基因敲除株,在体外噬斑试验中,该敲除株的生长速度与野生型RH虫株基本一致;在体内感染试验中,分别以100和1 000个敲除株的速殖子腹腔注射小鼠,小鼠的死亡时间与对照组基本一致,说明MORN2基因的缺失几乎不影响RH虫株在体外培养时的生长速度和感染小鼠的毒力。本研究证明了MORN2基因在RH虫株中无表型功能,为进一步探究弓形虫的功能基因奠定了基础。     

弓形虫MORN2基因敲除株的构建及其表型鉴定

本研究旨在构建弓形虫（Toxoplasma gondii）Ⅰ型RH虫株的膜占位与识别联结蛋白2（membrane occupation and recognition nexus protein，MORN2）基因敲除株，探究MORN2基因的表型功能。利用CRISPR/Cas9技术在sgRNA设计网站筛选出以MORN2基因为靶标的sgRNA并设计引物，以pSAG1∷CAS9-U6∷sgUPRT质粒为模板，在Q5酶作用下构建出MORN2靶向CRISPR的质粒；在MORN2靶点两翼约500 bp设计同源臂引物，以pUPRT∷DHFR-D质粒为模板构建含有乙胺嘧啶药物抗性基因（DHFR）的同源片段；将CRISPR质粒与同源片段电转染到弓形虫速殖子中，进行乙胺嘧啶药物筛选、96孔板单克隆筛选及PCR鉴定。结果显示，试验成功获得MORN2基因敲除株，在体外噬斑试验中，该敲除株的生长速度与野生型RH虫株基本一致；在体内感染试验中，分别以100和1 000个敲除株的速殖子腹腔注射小鼠，小鼠的死亡时间与对照组基本一致，说明MORN2基因的缺失几乎不影响RH虫株在体外培养时的生长速度和感染小鼠的毒力。本研究证明了MORN2基因在RH虫株中无表型功能，为进一步探究弓形虫的功能基因奠定了基础。     

弓形虫病治疗药物的研究进展

弓形虫病是一种呈全球分布的重要的人兽共患寄生虫病,能感染包括人在内的所有温血动物。目前对该病的防控主要依赖药物。临床上联合使用磺胺嘧啶与乙胺嘧啶是目前治疗弓形虫病的黄金标准,但该疗法具有一定的毒副作用,且长期使用易产生耐药性。因此,针对弓形虫病的药物研究一直是研究热点。螺旋霉素、甲氧苄啶－磺胺甲噁唑等常作为替代药物用于弓形虫病的治疗,但均具有不同的局限性。因而,人们将研究重点转移到天然产物上。研究以植物提取物为主,通过筛选具有抗弓形虫的活性分子,并对其进行适当的化学修饰,可增强抗虫活性,降低毒副作用。在动物提取物中,某些动物的毒液具有抗弓形虫活性,可作为候选药物。随着研究手段的提升,一些原有药物的新活性不断被发现。在"旧"药新用研究方向,一方面以亲缘关系为标准,针对其他抗寄生虫药物进行抗弓形虫活性探索;另一方面以药物作用靶点为标准,对治疗其他疾病的药物进行抗弓形虫活性研究。文章对弓形虫病临床用药史、天然产物的开发及"旧"药新用这3个方面进行综述,以期为抗弓形虫病药物的研究提供新的思路。     

野生动物弓形虫病研究进展

弓形虫是一种重要的胞内寄生原虫,可以感染几乎所有的温血动物。食肉性动物中猫科动物对弓形虫病的传播起着重要的作用,它是惟一的可以排泄含有弓形虫的卵囊到环境中的动物,进而使全世界的人和动物都有机会感染弓形虫病,而草食性动物和杂食性动物则是重要的中间宿主。然而野生动物感染弓形虫病之后往往缺少明显的临床症状,很难在第一时间判断出是否感染弓形虫。野生动物关系到整个生态系统的稳定,对整个生物界起着至关重要的作用,应该引起我们极大的关注和重视。论文就弓形虫在野生动物中的感染情况及临床症状加以概括,为其在野生动物中的流行趋势、诊断和防控的深入研究提供资料。     

寄生虫蛋白酶体的研究进展

近年来,蛋白酶体的分子组成、亚基、生化机理、胞内功能等方面的研究受到广泛关注,发展迅速.蛋白酶体的主要生物学功能包括:降解细胞内蛋白质、调节细胞周期、促进细胞凋亡、调节转录因子、增加抗原提呈等.在寄生虫中,蛋白酶体不仅参与胞内寄生虫的生长发育调节,同时对宿主造成损伤,并可诱导宿主产生对其的免疫应答.对寄生虫蛋白酶体的研究有助于深入了解寄生虫的入侵机制,为寄生虫病的防治提供新思路.作者对蛋白酶体的结构、功能及寄生虫蛋白酶体的研究进展作一综述.     

西藏部分地区羊棘球蚴感染情况调查及影响因素分析

为调查西藏部分地区羊棘球蚴感染情况并分析其感染的危险因素，本研究利用剖检法和PCR法对西藏部分地区的281只羊的各组织样品进行羊棘球蚴检测，通过SPSS 27软件对281只羊组织样品的检测结果进行卡方检验分析，将有统计学意义(P<0.1)的因素建立二元Logistic回归模型，分析羊棘球蚴感染的危险因素，并以优势比(OR值)判定这些因素引发感染的危险性。结果显示，本次调查区域内羊棘球蚴均为细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)，其感染率为37.01%(104/281)，其中仲巴县感染率最高，达62.26%(66/106)，其中4个县区感染率均在20%～30%。年龄差异和海拔因素与羊棘球蚴感染率均呈正相关，不同采样地点和不同羊的(绵羊、山羊)棘球蚴感染率均差异显著，不同采样时间羊感染率差异不显著。其中，羊年龄差异是西藏部分地区棘球蚴感染的危险因素。应当针对危险因素进行合理干预，以降低感染风险。本研究对西藏部分地区羊棘球蚴感染情况进行调查研究，为家畜包虫病的防治提供参考。