猪卵巢颗粒细胞分离培养及鉴定

为构建猪卵巢颗粒细胞的体外培养体系,研究毒素的生殖毒性奠定基础,采用机械分离法从1～5 mm的卵泡中提取猪卵巢颗粒细胞,苔盼蓝染色计算细胞存活率,Giemsa染色和结晶紫染色观察细胞形态,免疫细胞化学染色方法检测促卵泡刺激素受体(FSHR)表达来鉴定颗粒细胞,MTT方法测定细胞生长曲线.结果显示分离提取的猪卵巢颗粒细胞存活率为65%左右,细胞纯度＞97%,细胞结构完整,边缘分明,胞核呈卵圆形位于靠近胞质的中央.另外细胞生长曲线表明,细胞从24 h开始进入对数生长期,并于96 h达到最高密度,之后进入平台期.分离培养的颗粒细胞生长状态良好,且细胞纯度＞97%,是理想的适合进行毒素生殖毒理学的细胞培养体系.     

圆弧青霉菌毒素-青霉酸间接竞争ELISA检测方法的建立

对圆弧青霉菌毒素-青霉酸的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测条件进行优化,建立最佳反应条件下的间接竞争酶联免疫吸附试验。以间接非竞争ELISA基本操作步骤为基础,优化ELISA反应过程中的反应条件,最后建立青霉酸的间接竞争ELISA检测法。经在均一性良好酶标板测试,抗体最适工作浓度为1∶4×103,人工抗原的饱和浓度为3.35μg/mL。试验结果显示,37℃包被2 h,用0.2 g/L BSA封闭液封闭1 h可达到良好的封闭效果;底物的最适反应时间为10 min;以板外竞争反应模式为佳。试验初步建立了青霉酸间接竞争酶联免疫吸附法,为将来ELISA试剂盒的研制奠定基础。     

三聚氰胺与三聚氰酸对小鼠肾脏损伤及其机理的研究

旨在探讨三聚氰胺及其同系物三聚氰酸对肾脏组织的损伤及其损伤机理,为防制其对动物泌尿器官的危害提供理论依据。120只雄性SD小鼠随机分为6组,每组20只,体质量20～30g。对照组蒸馏水灌胃,染毒组采取隔天灌胃方式,A组三聚氰胺50mg·kg-1体质量,B组三聚氰酸50mg·kg-1体质量,C、D、E组三聚氰胺与三聚氰酸混合物(三聚氰胺+三聚氰酸等量混合)高、中、低剂量分别按50、10、2mg·kg-1体质量灌胃,持续30d。测定血清尿素氮(BUN)、肌酐(CRE),肾脏组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量,观察肾组织形态学,TUNEL法检测肾脏组织细胞凋亡,RT-PCR法检测肾脏组织Bcl-2、Bax、Cyt-c基因的相对表达以及免疫组化法检测相关蛋白的表达。三聚氰胺与三聚氰酸混合物能引起明显的肾脏组织细胞损伤,呈剂量相关性,表现为BUN和CRE升高,SOD活性降低,MDA含量升高,组织形态学可见明显的肾小管损害;混合组凋亡率明显增高,其中混合高剂量组与对照组相比,差异极显著(P0.01),Bax、Cyt-c表达均高于对照组,而Bcl-2则低于对照组。三聚氰胺与及其与三聚氰酸混合物可以通过脂质过氧化和线粒体通路介导凋亡共同作用引起肾损伤。     

桔青霉毒素细胞毒性及其检测方法研究

桔青霉毒素是一种真菌毒素,多存在于发霉饲料和含红曲添加剂的食品中,对人类和动物的健康有严重危害。作者总结了最近几年国内外关于桔青霉毒素的报道,从体外和体内两个角度详细的综述了桔青霉毒素的毒性和常用检测方法研究进展,为桔青霉毒素的诊断、检测和防治提供一定依据。