牛血清淀粉样蛋白A时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒研制

本研究旨在研制一种牛血清淀粉样蛋白A（SAA）时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒,用于牛奶中SAA含量的临床快速检测。采用双抗体夹心法结合荧光免疫层析技术,在结合垫上固定荧光微球标记的抗SAA单克隆抗体及荧光微球标记的鸡IgY的混合物,在硝酸纤维素膜的检测区包被另一株抗SAA单克隆抗体,在硝酸纤维素膜的质控区包被山羊抗鸡IgY。经抗体原料筛选及荧光微球标记抗体的工艺优化后,绘制标准曲线并对试剂盒的空白限、精密度、稳定性及样本测试性能进行初步评估。结果显示,Medix SAA-2单克隆抗体包被与YBX SAA-3单克隆抗体标记为最适抗体配对原料。荧光微球标记抗体的工艺中,荧光微球与抗体的质量投料比为40∶1、偶联剂与荧光微球羧基摩尔比为2∶1的条件为最优组合。试剂盒标准曲线的四参数拟合曲线方程为y=（1.03947-0.00182）/[1＋（x/12.08222）×（-0.84692）]＋0.00182,线性相关系数R²=0.9997。研制的牛SAA检测试剂盒空白限为0.052 mg/L。精密度测试结果显示,批内变异系数 < 15%,批间变异系数 < 20%。室温稳定性试验表明,试剂盒在室温密封存放6个月的荧光T/C值相对跌幅约15%。自制试剂盒与上海蓝基试剂盒的样本对比测试相关系数R²为0.97。综上所述,本试验研制的试剂盒具有操作简便、灵敏度高、成本低廉等优点,能满足临床测定需求,可作为一种新型牛SAA检测的快捷、准确的检测手段。     

牛乳铁蛋白胶体金定量免疫检测试剂卡的研制

本试验旨在建立一种能快速定量检测乳制品中牛乳铁蛋白(BLF)含量的胶体金免疫层析方法。以BLF为免疫原免疫BLAB/c小鼠，用间接ELISA筛选、鉴定获得单克隆抗体；继而用胶体金免疫层析技术建立BLF的检测方法，并对研制的胶体金定量检测试剂卡进行重复性、线性、样本测试相关性和特异性评估。结果显示：本试验制得BLF单克隆抗体2株，效价均大于3.2×10~6;基于这2株单抗建立的BLF胶体金定量检测试剂卡的空白限为21.86μg/mL,变异系数(CV)<13%,线性测试其直线拟合线性回归相关系数R=0.997 7,与液相色谱法检测样本结果的相关系数R=0.988 5,与α-乳白蛋白和β-乳球蛋白均无交叉反应。综上，本试验研制的BLF胶体金定量检测试剂卡可为乳制品中BLF含量的检测提供一种准确、灵敏的方法。