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猪传染性胃肠炎病毒检测的新方法 总被引:1,自引:0,他引:1
猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的以猪呕吐、腹泻、脱水为特征的传染病,对新生仔猪具有高度致死率(通常100%)的传染病,给养猪业带来严重危害,已成为重要的猪病毒性腹泻病之一。因此对该病的诊断显得尤为重要。检测TGEV的传统方法主要有病毒分离、中和试验、免疫荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验和电镜技术等,这些方法对于检测TGEV和防制TGE起到了重要作用。目前cDNA探针、RT—PCR已成为国际上检测TGEV的主要方法,为临床上诊断TGE提供灵敏、快速的方法。 相似文献
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用PCR方法,从含有银狐生长激素mRNA的阳性重组质粒pMD18-T-IGH中亚克隆出生长激素基因,然后定向插入到真核表达载体pcDNA3.1( )中,通过酶切、质粒PCR和序列测定对质粒进行鉴定表明,成功构建了银狐生长激素成熟mRNA真核表达质粒pcDNA3.1-IGH. 相似文献
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以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板,通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点,酶切后与PCI真核表达载体连接在一起,测序后经比较,所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99·8%.将重组质粒转染PK细胞,检测所转染的pIFN-γ的抗病毒活性.试验结果表明,转染pIFN-γ试验组与正常细胞接毒对照组比较有显著差异,说明所构建的重组质粒转染后具有抗病毒作用. 相似文献
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2004年黑龙江省新城疫病毒分子流行病学分析 总被引:6,自引:3,他引:3
2004年从黑龙江省部分鸡场疑似新城疫(ND)病死鸡和鸽体内分离到9株NDV。对这9株NDV生物学特性进行测定,并对其F基因包括裂解位点在内的540bp片段进行了克隆、测序和同源性分析。结果表明,9株NDV鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)分别在47.8h~78.4h和1.51~2.00之间;8个分离株在F蛋白裂解位点氨基酸顺序为112RRQKRF117,1个分离株F蛋白裂解位点氨基酸顺序为112RRQRRF117,表明了它们全为ND中、强毒株。同源性分析显示,9株NDV分离株之间核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为79.7%~99.7%和79.8%~100%;系统发生树分析表明,6株分离株与台湾株(TW98、TW99和TW2000等)遗传距离较近,可能有共同的起源,为基因Ⅶe型NDV,2株为鸽源NDV基因Ⅵ型,1株与我国特有的F48E9遗传距离最近,为基因Ⅸ型NDV。 相似文献
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新城疫La Sota、V4疫苗免疫鸡和免疫攻毒鸡的特异性IgA抗体动态变化规律比较 总被引:4,自引:0,他引:4
应用间接ELISA对新城疫LaSota、V4疫苗免疫鸡及免疫攻毒鸡的IgA抗体动态变化进行了测定和比较。试验表明,LaSota和V4免疫鸡泪液中特异性IgA均在免疫后第5天出现,8天开始明显升高,与血清中IgG出现时间相似,免疫后21天达到高峰。LaSota免疫鸡的泪液IgA抗体水平略高于V4免疫鸡;而两免疫组哈德氏腺(HG)中的特异性IgA高峰出现较迟。免疫攻毒鸡泪液中的特异性IgA抗体水平均先呈短暂的升高,之后下降的趋势,而HG中的IgA则首先表现降低,之后很快升高,5天后趋于下降,两攻毒组差异不显著,对IgA回忆应答均不明显。 相似文献
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新城疫F48E9株L基因克隆与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
本实验根据已知新城疫病毒L基因序列分别设计了两对引物,引物1(L1)、引物2(L2)、引物2(L2)、引物3(L3)、引物4(L4),以L1/L2为引物可以扩出4050bpF48E9株L基因的A片段(LA),以L3/L4为引物可扩增出3504bpE48E9株L基因的B片段(LB)。LA和LB2个片段经特异性双酶切后用T4DNA连接酶连接成完整的F48E9株L基因并克隆到pMD18-T载体中,对克隆后L基因5’端、3’端和连接点处的核苷酸序列进行了测定,经DNASIS软件分析表明为NDVL基因,证明我们获得了F48E9株L基因。 相似文献
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我国部分地区NDV的分子流行病学研究 总被引:56,自引:10,他引:46
本研究根据新城疫病毒(NDV)F基因编码区1-374位核苷酸序列计算其遗传距离并给出了NDV的系统发育进化树,将68株NDV分为9个基因型(30株为国内分离株),其中Ⅰ-Ⅵ是早已存在的老基因型,Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ为新发现的基因型,特别是Ⅸ为我国特有的基因型(F48EO、M3、HLJ-3、HeB-1P和NM-5)。1997-1999年我国云南、广西、甘肃、陕西、新疆等地分离的YN-1P、GX-3、H1、H2、P1、GX-1、GX-2、GS-3、SHX-2、SHX-3、SHX-6、SHX-7、XJ-2和1991年分离的HuB-1均属于Ⅶ基因型,该基因型的病毒是90年以来引起新城疫发生的主要病原。根据遗传距离和分离年代可将此基因型进一步划分为5个基因亚型,分别是Ⅶa、Ⅶb、Ⅶc、Ⅶd和Ⅶe。此外HuN-1/98、HLJ-4/95和HeH-1P属一个老的基因Ⅵ,1979-1985年分离自青海的QH-1、QH-2、QH-4属于一个新的基因型-Ⅷ型。可见在我国新城疫的流行是极其复杂的,既有老基因型的危害(Ⅰ-Ⅵ),又有新基因型(Ⅶ)的流行,更有我国独特Ⅷ和Ⅸ基因潜伏。 相似文献
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根据新城疫病毒(NDV)F48E9国内标准强毒株编码序列设计了2对特异性引物,分别用于扩增M和NP基因。经序列测定,将其克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,转化E.coliBL21(DE3),筛选表达NDVF48E9株M蛋白和NP蛋白的菌株。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析结果表明,NDVM蛋白在E.coliBL21(DE3)内以可溶形式存在,而NP蛋白以包涵体的形式表达。用纯化的M和NP蛋白免疫鸡制备超免疫血清,进行Western-blot分析;结果,它们可以与真核表达系统表达的M和NP蛋白以及NDV发生特异性反应,表明,原核表达系统表达的NDVM和NP蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。 相似文献
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为了获得重组的银狐生长激素,本试验用Trizol的方法从银狐脑垂体组织中提取总RNA,以mRNA为模板,用RT-PCR方法扩增出生长激素成熟cDNA片段并克隆到载体质粒pMD18-T中;通过含有BamHⅠ酶切位点的特异引物从pMD18-T-fGH中亚克隆出cDNA片段,并将其重组到pPROEXTMHta质粒中,构建了银狐生长激素原核表达质粒pPROEXTMHta-fGH。将pPROEXTMHta-fGH原核表达质粒转化DH5α大肠杆菌,用终浓度1 mmol/L IPTG进行诱导,通过SDS PAGE进行检测。结果表明在转化的大肠杆菌中检测到分子量为26 kD的fGH蛋白的存在,表达量占菌体蛋白总量的35%,并且表达产物以包涵体的形式存在。 相似文献