羊痘病毒PCR检测方法的建立和试剂盒的研制

根据GenBank上已发表的羊痘病毒(CPV)的全基因序列,设计并合成了一对能特异性扩增羊痘病毒的引物,扩增产物大小约为445bp。通过对PCR方法的优化,建立了检测羊痘病毒的PCR方法,并研制出检测试剂盒。同时对试剂盒的敏感性,特异性和稳定性进行了研究。实验结果表明,该试剂盒具有良好的敏感性和特异性,稳定性在-20℃至少可以保存一年。     

羊痘病毒江苏株P32基因的克隆与序列分析

根据GenBank中羊痘病毒基因(CPV)的核苷酸序列,设计了1对特异性检测引物。采用此引物检测来自于江苏丹阳的24份发病羊的皮肤痂皮。参考已发表的P32全基因的特异性引物,随机选择4份阳性DNA进行P32片段的扩增。将扩增产物纯化后连接pMD18-T载体,转化DH5α大肠埃希氏菌,选择阳性克隆送基因公司测序。应用DNAStar等分子生物学软件,对所测P32序列与GenBank中的国内外CPV毒株进行了同源性比较和遗传进化树分析。结果发现,24份疑似病料检测全是阳性;4个P32基因扩增产物均为1 023 bp,且样品间P32基因的核苷酸同源性为100%,与GenBank上已发表的的P32基因序列的相似性为97.7%~100%,且中国分离株在进化上属于同一分支。     

羊痘的PCR诊断与防制

通过对发病羊进行临床诊断、病理剖检和PCR检测，最终确诊为山羊痘病毒。同时针对该病的流行病学和临床症状等提出了有效的防制措施，使得疫情得到了有效的控制。