抑制性消减杂交技术(SSH)在动物免疫相关基因方面的研究进展

正对于一个生物个体来讲,尽管所有细胞的基因组成是相同的,但在不同的细胞、同一细胞不同的分化阶段或受到外界的不同刺激时,相关基因的表达及蛋白质的功能都会有所差异[1]。基因的差异表达是调控生物生命活动的核心机制,个体的生长发育和衰老死亡,以及对各种环境因子的应答,本质上都离不开差异基因的表达。为了阐明各种生命过程的分子机制,必须对差异表达基因进行分离、克隆并进一步研究,抑制性消减杂交     

产γ-氨基丁酸植物乳杆菌对小鼠生长、血清抗氧化能力及盲肠菌群的影响

为研究产γ-氨基丁酸(GABA)植物乳杆菌GA8对小鼠生长性能、血清抗氧化能力和盲肠菌群的影响,将60只昆明系小鼠随机分成5组,试验1、2、3组小鼠饮用水中分别添加1×106、2×106和4×106 cfu/mL的产GABA植物乳杆菌GA8,对照组在饮用水和日粮中不添加任何制剂,GABA组在日粮中加入15μg/g GABA,小鼠饲喂30d后,检测其生长性能、血清抗氧化能力及盲肠菌群结构。饲喂产GABA植物乳杆菌GA8后,试验3组小鼠末重和平均日增重均显著高于对照组(P0.05),其他组间无明显差异;试验1、2、3组的总抗氧化能力(T-AOC)和总超氧化物歧化酶(SOD)活性都有提高,丙二醛(MDA)含量降低,但差异不显著;试验3组较对照组大肠杆菌明显减少(P0.01),乳杆菌明显增加(P0.05),试验1、2组肠球菌减少(P0.05),其他差异不显著;采用PCRDGGE技术分析,试验1、2、3组和GABA组肠道菌群的多样性指数、均匀度和丰富度均高于对照组。结果表明产GABA植物乳杆菌GA8能明显提高小鼠的生长性能、促进有益菌生长和抑制有害菌繁殖,对血清抗氧化能力有一定的影响。     

连梅止痢中药制剂对大肠埃希菌K88感染仔猪的疗效

探讨连梅止痢中药制剂对大肠埃希菌K88感染的仔猪腹泻的疗效。72头21日龄初始体质量平均为(4.41 ±0.01) kg的仔猪被分为6组:空白对照组、发病组、低剂量(0.5 mL·kg^-1 BW)、中剂量(1.0 mL·kg^-1 BW)、高剂量组(1.5 mL·kg^-1 BW)及抗生素组(0.2%恩诺沙星2 mL·头^-1)。给断奶仔猪灌服一定数量的大肠埃希菌K88建立腹泻模型,利用乌梅、黄连、诃子以及秦皮原料制备的连梅止痢中药制剂(含生药1 g·mL^-1)对发病猪进行治疗,观察该中药制剂对腹泻病的疗效。结果表明,该中药制剂对仔猪大肠埃希菌腹泻的治愈率为80%。实时定量PCR检测结果表明,在用药的整个阶段中剂量组仔猪粪便中的大肠埃希菌K88平均数量与发病组相比显著减少 (P<0.05),其他剂量组与发病组相比差异不显著(P>0.05)。从仔猪肠道形态上观察,抗生素组和中剂量组仔猪肠道组织结构基本完整。经过生存分析发现,中剂量中药制剂与发病组相比能显著提高仔猪生存率(P<0.05)。发病组生存曲线相比其他组的陡峭,而中剂量组的曲线最平缓,中药制剂能降低仔猪的死亡率。     

蜡样芽孢杆菌PAS38对肉仔鸡生长性能及免疫功能的影响

为了研究蜡样芽孢杆菌PAS38制剂对肉鸡生长性能和免疫功能的影响,选用80只7日龄爱拔益加(AA)肉鸡,随机分成2组,每组4个重复,每个重复10羽,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加0. 05%的蜡样芽孢杆菌PAS38制剂,试验期35 d。结果显示:试验组鸡体质量及净增质量均比对照组高,但仅在28 d时差异显著(P 0. 05),空肠和回肠淀粉酶和蛋白酶活性均显著或极显著高于对照组(P 0. 05或P 0. 01);试验组的胸腺和脾脏指数在28,42 d时显著或极显著高于对照组(P 0. 05或P 0. 01),法氏囊指数在42 d时显著高于对照组(P 0. 05);试验组血清免疫球蛋白含量均高于显著或极显著高于对照组(P 0. 05或P 0. 01),42 d时试验组血清中IL-2和IFN-γ含量高于对照组(P 0. 05),IL-4含量低于对照组(P 0. 05);试验组肉鸡的胸腺和法氏囊组织中IL-2、IFN-γ、GBP1、IRF1的mRNA表达量均有不同程度地高于对照组,IL-10 mRNA转录水平低于对照组; IL-4 mRNA转录水平在胸腺组织中显著高于对照组(P 0. 05),而在法氏囊组织中则显著(P 0. 05)或极显著(P 0. 01)低于对照组。结果表明,蜡样芽孢杆菌PAS38具有促进肉鸡的生长性能和增强肠道消化酶活性,促进免疫器官的发育,并且通过调节免疫相关基因mRNA的表达来提高机体的非特异性免疫和细胞免疫。     

藏猪IGF-1成熟肽基因的克隆及原核表达

旨在克隆藏猪胰岛素样生长因子1(IGF-1)的成熟肽基因,并进行原核表达的研究。提取藏猪肝脏组织RNA,通过RT-PCR扩增出藏猪IGF-1全长基因,构建重组质粒p MD19-T-IGF-1,以p MD19-T-IGF-1质粒为模板,克隆IGF-1成熟肽序列并构建成熟肽p ET-32α-IGF-1表达质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3),对IPTG诱导剂浓度和诱导时间进行优化,Ni-NTA琼脂纯化融合蛋白后采用Western Blot对其鉴定。结果显示,IGF-1成熟肽基因(315 bp),成功构建了成熟肽p ET-32α-IGF-1原核表达质粒;重组大肠杆菌BL21-IGF-1以包涵体形式表达出分子量约31 k Da融合蛋白,最优IPTG浓度为0.5 mmol/L,最佳IPTG诱导时间为10 h;纯化获得了高纯度的融合蛋白,经鉴定IPTG诱导表达和纯化的蛋白为IGF-1融合蛋白。结果表明,成功构建了表达质粒p ET32α-IGF-1及获得重组大肠杆菌BL21-IGF-1,表达了藏猪IGF-1成熟肽融合蛋白及该蛋白具有抗原抗体反应活性。     

重组枯草芽孢杆菌SE1对肉鸡生长性能、肠道消化酶活性和菌群的影响

本试验旨在研究芽孢表面展示鸡白痢沙门氏菌Omp C重组枯草芽孢杆菌SE1对肉鸡生长性能、肠道消化酶活性和菌群的影响。选择7日龄肉鸡120只,随机分为3组,每组4个重复,每个重复10只鸡。A组(对照组)饲喂基础饲粮,B组和C组分别在基础饲粮中添加0.1%(1.0×106CFU/g)枯草芽孢杆菌168制剂和0.1%(1.0×10~6CFU/g)重组枯草芽孢杆菌SE1制剂,试验期35 d。结果显示:1)与A组相比,C组肉鸡的终末体重和平均增重分别增加6.14%和6.76%(P0.05),料重比降低8.21%(P0.05)。2)28、42日龄时,B组和C组肉鸡的空肠脂肪酶和回肠蛋白酶活性显著高于A组(P0.05);B组和C组肉鸡的肠道消化酶活性无显著差异(P0.05)。3)28、42日龄时,B组和C组肉鸡的回肠、盲肠大肠杆菌数量显著低于A组(P0.05),盲肠乳杆菌数量显著高于A组(P0.05)。16S rRNA V3区聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)结果显示,B组和C组肉鸡的盲肠菌群丰富度、均匀度和香农-维纳指数均显著高于A组(P0.05);C组肉鸡盲肠菌群的相似性在28、42日龄时分别比A组高26.8%和15.6%,C组和B组之间无显著差异(P0.05)。结果表明,重组枯草芽孢杆菌SE1具有与枯草芽孢杆菌168相同的效果,能有效促进肉鸡生长,提高肠道脂肪酶和蛋白酶活性,调节肉鸡肠道菌群,提高肠道菌群稳定性和多样性。