ICR小鼠Mxl基因的克隆及组织表达

为了对ICR小鼠的Mxl基因序列特征进行比较分析,揭示该基因的组织特异性表达规律,用干扰素诱导剂poly(I)/(C)诱导小鼠腹腔巨噬细胞,应用RT-PCR技术克隆小鼠Mxl基因全长编码区序列,并用半定量RT-PCR方法研究该基因在组织中的特异性表达规律.结果显示,从雌性ICR小鼠腹腔巨噬细胞中克隆的Mxl基因的CDS...     

枣树采收后的管理技术要点

我区红枣采收期一般在10月上、中旬。枣树采收后到落叶越冬还有较长的时间,此时树体的营养由采前向果实输送而转向自身积累,是恢复树势的关键时期。加强采后管理,可增加树体营养的贮备,恢复树势,增强树体的抗逆性,为来年丰产优质打下良好的基础。     

提高核桃芽接成活率的主要措施

核桃芽接是培育优质苗木,促进生产发展,实现良种品种化的基本手段之一,生产上常采用方块形芽接法,此方法嫁接成活率较高,而且嫁接后接穗发育良好,但是接前准备和接后管理工作不当,不但会使嫁接成活率降低,而且还会影响接穗正常生长。因此在田间实际操作中除了掌握正确的芽接技术外还应注意以下几个方面。     

猪瘟、禽流感等重大动物疫病疫苗免疫效果评价与分析

本试验随机选取猪瘟、禽流感等7种重大动物疫病疫苗,按照农业部免疫方案和疫苗说明书的要求进行免疫.疫苗免疫当天及免疫结束后28d采血分离血清,采用ELISA的方法检测疫苗免疫后抗体水平的变化.实验结果表明:猪瘟、禽流感等7种疫苗免疫后抗体合格率均高于70%,免疫效果均达到农业部规定要求;高致病蓝耳弱毒苗免疫抗体合格率达到100%,高致病蓝耳灭活苗抗体免疫合格率为76.19%,弱毒苗免疫效果优于灭活苗.     

表达抗流感病毒基因重组慢病毒滴度测定及感染效率分析

分别将靶向禽流感病毒(AIV)多靶点siRNA和鸡Mx基因克隆到p201慢病毒表达载体,采用鸡β-actin启动子替换p201慢病毒载体CMV启动子构建重组慢病毒载体p201-β-Mx-siRNA。并将其与辅助包装质粒共转染293T细胞,72h后收集细胞上清,实时荧光定量PCR测定重组慢病毒(rLV-MX-siR-NA)与对照组重组慢病毒(rLV-GFP)CT值,两者比较确定rLV-MX-siRNA滴度。rLV-Mx-siRNA以MOI=4感染猪胎儿成纤维细胞(PEF)并传代培养,提取后代细胞RNA检测外源基因转录以及应用间接免疫荧光试验检测鸡Mx蛋白的表达。结果表明,rLV-Mx-siRNA浓缩后滴度与已知滴度的rLV-GFP相等,为2×108 TU/mL,感染PEF效率>95%。感染rLV-Mx-siRNA的细胞传至第5代和第10代检测到外源基因转录以及鸡Mx蛋白的表达。表达鸡Mx基因和靶向AIV多靶点siRNA重组慢病毒滴度的测定与感染效率的分析,其结果为研究抗AIV转基因猪及其抗AIV的体外评价奠定了基础。     

鸡Mx蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

Mx蛋白为GTP酶动态蛋白家族成员,已被证明具有抗禽流感病毒、Thogoto病毒和水泡性口膜炎病毒等的作用.为制备鸡Mx蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的鸡Mx蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,分离脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆,经3次细胞克隆纯化后获得4株稳定分泌抗鸡Mx蛋白抗体的杂交瘤细胞株.间接ELISA测定4株MAb纯化后腹水的效价介于1∶3.2×104～1∶2.5×105之间.Westem blot结果证实4株MAb均具有良好的反应性;间接免疫荧光试验表明其中一株MAb与真核表达的鸡Mx蛋白发生反应.本研究为鸡Mx蛋白功能及表达鸡Mx蛋白的转基因动物等研究奠定了基础.