牛源金黄色葡萄球菌α溶血素单链抗体对小鼠乳腺的保护作用

为探究治疗奶牛乳腺炎的抗生素替代性生物制剂,研究将前期获得的特异性针对金黄色葡萄球菌毒力因子α溶血素的单链抗体scFvZZ107,在小鼠感染金黄色葡萄球菌乳腺炎模型中验证其保护作用。结果显示,3种不同剂量(5、10、15 μg)单链抗体处理组乳腺组织内细菌数量分别为25.42±1.3、3.33±0.53和4.8±0.78 lgcfu/mg,IL-1α的含量分别为49±7.91、31.37±2.26和57.34±4.48 pg/mL,IL-1β含量分别为40.91±7.39、47.81±4.78和39.2±2.28 pg/mL,IL-8的含量分别为48.64±1.86、41.65±3.07和45.74±1.56 pg/mL,与生理盐水处理组相比,单链抗体中、高剂量处理组乳腺内金黄色葡萄球菌检出量显著减少(P<0.05),且IL-1α、IL-1β与IL-8的含量均显著降低(P<0.05)。通过观察小鼠乳腺组织HE和TUNEL染色情况,与生理盐水处理组相比,scFv中、高剂量处理组乳腺组织更加完整,凋亡细胞的数量也更少,表明scFvZZ107对小鼠乳腺具有良好的保护作用。     

PAR-2在哺乳动物肠道炎症中的作用机制研究进展

越来越多的研究表明,蛋白酶激活受体2(PAR-2)在哺乳动物肠道炎症中发挥重要作用。近些年来备受关注的是PAR-2被激活以后其促炎作用和抗炎作用两方面。在小鼠结肠炎模型中,PAR-2的激活可促进肠道上皮细胞损伤、使肠道分泌增加、肠黏膜通透性增高、平滑肌松弛以及促炎性细胞因子表达上调等发挥促炎作用。然而,有研究表明,PAR-2被激活以后使辅助性T细胞1型细胞因子表达下调,可以减轻炎症,发挥抗炎作用。论文主要对目前PAR-2在多种哺乳动物肠道炎症疾病中的研究进展进行综述,探索肠道炎症中PAR-2的作用机制,为该病的治疗寻找新的路经。     

基于蠕形螨几丁质合成酶基因的PCR-RFLP及序列进化分析

检测33份来自上海地区的蠕形螨病犬毛囊样品,其中能成功检测出几丁质合成酶基因16株,与参考序列比对结果显示,16株样本株出现6类序列,其中9株没有发生突变,所有序列之间同源性在99.7%~99.9%,与其他参考株同源性在98.2%~100%之间。基于几丁质合成酶基因序列的遗传进化分析显示,6类序列分为2组,其中第3类序列单独为1组,第1、2、4、5、6类序列与日本、印度、陕西株为1个组。利用Cfr13I、BSPT1、HinfI、Eco131I对6类序列的扩增产物进行酶切,Cfr13I酶切可将第3类序列与其他序列区分开来,HinfI和BSPT1酶切可将第2类序列区分开来,而第1、4、5、6类序列由于序列之间同源性较高,除了突变的位点无法找到特异的酶切位点之外,即使存在酶切位点也无法准确地将不同序列区分开。由于Genbank关于蠕形螨的序列研究较少,已有序列之间同源性较高,可供RFLP序列分析的基因较少,本次试验将PCR-RFLP分子标记技术成功应用于蠕形螨研究,蠕形螨几丁质合成酶测序和酶切结果可用于蠕形螨的物种鉴定、亲缘关系及进化研究。     

一例犬蠕形螨皮肤病的诊断

门诊收治1例犬皮肤病病例,疑似蠕形螨感染。采集皮肤刮屑,镜下观察寄生虫形态;取病变皮肤组织进行病理学观察;提取病变皮肤DNA,扩增犬蠕形螨几丁质合成酶基因序列并进行产物测序。结果:皮肤刮屑中可观察到具有典型特征的蠕形螨;病理组织学观察发现蠕形螨寄生于感染皮肤毛囊中;从皮肤样品中成功扩增出一条长度为773bp的基因片段,该片段基因序列与GenBank上发表的犬蠕形螨几丁质序列相似性达99%。结论:皮屑寄生虫检查、病理学组织诊断和PCR诊断结果证实该病例为蠕形螨皮肤病。     

牛源抗金黄色葡萄球菌α溶血素单链抗体研制

由金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳腺炎给养殖业造成了严重损失,抗生素是治疗奶牛乳腺炎的首选方法,但易出现耐药菌株。而目前针对金黄色葡萄球菌的疫苗也不能对奶牛乳腺炎提供足够的保护,疫苗的主要作用机理是激发机体产生抗体,故被动免疫针对金黄色葡萄球菌毒力因子的抗体也许能对感染起到一定的治疗作用。本研究首先扩增得到影响其致病性的重要毒力因子-α溶血素(Hla)的编码基因,然后将其转化到E.coli中进行表达并纯化,再以此纯化产物为抗原,从牛源噬菌体单链抗体表达文库中筛选到了一株针对α溶血素(Hla)高亲和力的scFv,最终将该scFv进行纯化。本研究一方面为治疗金黄色葡萄球菌所致奶牛乳腺炎提供一种新思路,另一方面也为分子水平上研究α溶血素的致病机制提供了有效的阻断分子。