三种牛羊流产相关疫病在海西州的流行现状及分析

近年来,随着海西地区畜牧业的发展,牛羊流产现象也伴随多发,给牧民带来极大的经济损失。为调查布鲁氏菌病、衣原体病、弓形虫病在青海省海西州畜群中的整体流行状况,了解海西州牛羊流产多发的主要病因,对海西州31个乡镇97个牧业村的空怀牛羊群随机抽样,集中采血,分离血清,共分离牛羊血清共14114份,其中羊血清12620份,牛血清1494份。分别采用凝集试验、间接血凝试验和弓形虫快速检测卡对布鲁氏菌、衣原体和弓形虫进行抗体检测与数据分析。结果表明,羊布鲁氏菌、衣原体和弓形虫的抗体阳性率分别为0.056%、8.7%、0.11%;牛布鲁氏菌、衣原体和弓形虫的抗体阳性率分别为4.6%(69/1494)、5.8%(74/1494)、9.9%(87/1494),其中有15头牛同时检测到上述3种病原的抗体。海西州空怀羊群中衣原体阳性率最高,可能是导致羊流产的主要病因;空怀牛群中3种病原抗体阳性率普遍较高,且存在一定程度的共感染,流产病因较为复杂。     

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP可视化快速检测方法的建立与应用

为建立一种快速诊断美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(NA-PRRSV)的可视化检测方法,根据GenBank已发表的美洲型PRRSV经典病毒株JXA1序列,运用在线生物软件设计合成并筛选出1组引物,通过反应体系优化,建立了NA-PRRSV RT-LAMP可视化快速检测方法,并验证了该方法的特异性、敏感性,同时开展了初步临床应用。结果显示:该方法具有良好的特异性和较高的灵敏度,可检测病毒RNA模板的最低浓度为10 copies/μL;应用该方法检测30份临床样品,结果与实时荧光RT-PCR方法符合率为100%,进一步证实了该方法的可行性。结果表明,所建立的RT-LAMP检测方法具有特异性好、灵敏度高、快速、可视等优点,适用于NA-PRRSV的现场快速检测。本研究为NA-PRRSV的快速、准确鉴别提供了有效手段。     

2019—2021年北京市种猪场猪伪狂犬病病毒感染情况调查

为了解北京市种猪场猪群伪狂犬病病毒（PRV）感染情况,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）,对2019—2021年3个区采集的10 850份血清样品进行PRV感染抗体（gE抗体）检测。结果显示：2019—2021年,北京市3个区种猪场群体表观阳性率分别为84.38%、77.78%、64.71%,群体真实阳性率分别为86.10%(95%CI:73.95%～98.24%)、79.37%(95%CI:60.39%～98.34%)、66.03%(95%CI:43.22%～88.83%),下降趋势不显著（P> 0.05）;个体表观阳性率分别为53.95%、41.52%、35.59%,个体真实阳性率分别为55.05%(95%CI:53.05%～57.05%)、42.37%(95%CI:40.90%～43.84%)、36.32%(95%CI:34.85%～37.79%),呈显著下降趋势（P <0.05）。育成猪、经产母猪和后备母猪个体阳性率逐年下降,而育肥猪个体阳性率逐年升高,由2019年的38.45%,提高到2021年的60.79%。结果表明,北京市种猪场PRV感染得到一定的控制,但感染...     

6种狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的比对

为评价不同品牌狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的有效性,以确保实验室检测结果更加客观可靠,采集85份北京市犬临床血清样本,分别用荧光抗体病毒中和试验(FAVN)和6种品牌试剂盒(包括国产、进口,阻断法、间接法)进行抗体检测。以FAVN检测结果为标准,通过Kappa一致性检验、χ2检验及诊断效能评价,比对分析6种品牌试剂盒的检测效果。结果显示:6种试剂盒的一致性有差异,且整体一致性不高;3种试剂盒的检测结果与FAVN无统计学差异(P0.05),另3种存在差异(P0.05);2种试剂盒的灵敏度及符合率较好,均在90%左右,2种试剂盒较差,在70%左右,剩余2种在80%左右。结果表明:不同品牌的商品化试剂盒检测效果存在差异,且这种差异与品牌来源及试剂盒类型无明显相关性。因此,建议在实际监测工作中,以标准方法为参考,对商品化试剂盒进行一致性、差异性检验和诊断效能评价,将检测效果作为筛选试剂盒的首要考量因素,以确保实验室检测结果客观准确。     

1种布鲁氏菌微滴式数字PCR检测方法的建立

本研究旨在构建1种布鲁氏菌（Brucella）微滴式数字PCR方法（droplet digital PCR，ddPCR）。以布鲁氏菌BCSP31基因为靶基因，选取保守区域设计引物和探针，构建了布鲁氏菌微滴式数字PCR方法。然后优化了ddPCR反应中的引物、探针浓度及退火温度，并进行方法的灵敏度、特异性和重复性试验。结果表明，ddPCR的最佳引物和探针浓度分别为900 nmol·L^-1和250 nmol·L^-1，最佳的退火温度为58℃。ddPCR的线性良好，最低检测下限为1.12 copies·μL^-1，与大肠杆菌O：157菌株等其他4种细菌无交叉反应，而且批内重复性和批间重复性都较好。综上表明，本研究建立的ddPCR方法灵敏度高、特异性强，可对布鲁氏菌感染的临床样品进行定量检测。     

一株鹿源牛种布鲁菌的鉴定及全基因组分析

本研究旨在对一株鹿源牛种布鲁菌(Brucella abortus)BJ1进行全面鉴定,为研究鹿的布鲁菌病提供参考。将B.abortus BJ1培养后,挑取单菌落分别接种到含硫堇或碱性品红的TSA培养基,观察其生长状态;将接种有B.abortus BJ1的TSA平板分别置于普通生化培养箱和CO_2培养箱37℃培养72 h,观察其对CO_2的依赖性;通过醋酸铅培养基测定B.abortus BJ1生长过程中是否产生H_2S;通过结晶紫染色和热凝集试验测定B.abortus BJ1的表型;通过平板凝集试验测定B.abortus BJ1单因子血清反应性;采用AMOS-PCR鉴定细菌种属;为测定其毒力,以1×10~9CFU感染豚鼠,14 d后测定豚鼠每克脾组织的含菌量。使用二代测序方法测其全基因组序列并对其进行分析和注释,将结果与B.abortus 2308比对,并通过Mauve软件进行系统进化分析。结果显示:B.abortus BJ1不依赖CO_2,产H_2S,可以在含硫堇和碱性品红的培养基上生长;表型为光滑型,与M因子血清发生凝集;豚鼠脾含菌量为1.17×10~6～2.05×10~6CFU·g~(-1);基因组大小为3 270 584 bp,在基因编码区内与B.abortus 2308株相比有46处Indel差异,进化树分析显示与B.abortus 8416有较高的同源性。通过全面鉴定,确定B.abortus BJ1为牛种9型,为更深入地了解我国布病发生情况和鹿的布病防控提供参考。     

非洲猪瘟病毒实时荧光LAMP检测方法的建立与应用

为建立一种快速简便、灵敏度高、准确性好的非洲猪瘟病毒恒温快速检测方法,根据ASFV P72基因保守区域设计特异性引物,优化引物浓度、反应温度、反应时间,建立了一种基于SYTO9荧光染料的非洲猪瘟病毒实时荧光LAMP快速检测方法。结果表明,该方法在63℃条件下扩增40 min,该方法灵敏度高,最低可检测限为10 copies/μL;特异性良好,与猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒、欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒无交叉反应;重复性好,变异系数低于5%。对70份临床样本检测,4份血液样品和9份脾脏样品检测阳性,与荧光定量PCR检测结果符合率为100%。该方法灵敏度高、特异性强、重复性好、符合率高,适用于非洲猪瘟现场快速诊断。     

猪流行性腹泻病毒RT-LAMP检测方法的建立与应用

为建立一种适用于现场快速检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因编码区序列,分别设计合成3组引物,通过对引物的筛选和反应条件优化,建立了PEDV RT-LAMP可视化快速检测方法。灵敏度和特异性试验结果显示,本方法在65℃45 min对PEDV的检测灵敏度为2 copies/μL,与猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒均无交叉反应。利用该方法对30份送检的临床样品进行检测,检出阳性样品8份,与荧光定量RT-PCR检测结果一致。试验表明,所建立的RT-LAMP检测方法具有特异性好、灵敏度高、快速、结果可视、设备适用范围广等优点,适用于PEDV现场快速检测。