2种不同方法纯化乳酸杆菌重组S-层融合蛋白的比较试验

将重组菌E.coliBL21（含重组质粒pGEX-SLP）经IPTG诱导获得重组融合蛋白GST-SLP,分别用非特异性的氯化锂沉淀方法和特异性的Pierce（R）GST Spin Purification Kit纯化方法,将该融合蛋白进行纯化,纯化结果采用SDS-PAGE方法进行鉴定.结果显示,2种方法均能够获得大小约为71 ku的目的融合蛋白,但氯化锂沉淀方法纯化效果不及Pierce（R）GST Spin Purification Kit方法.该研究结果为进一步研究乳酸杆菌S-层蛋白生物学特性提供了参考.     

牛羊布鲁菌病（brucellosis）的诊断方法

布鲁菌病是一类由各型布鲁菌感染而引起的重要的人畜共患病之一。被感染的动物最常见的临床表现为流产、胎盘炎、附睾炎、睾丸炎等。人感染布鲁茵病后,多呈慢性经过,可损害人体多种器官。虽然病原学鉴定是一种常规有效的诊断布鲁茵病的方法之一,但由于其对操作人员安全以及实验室级别的要求非常严格,加之从患病动物体内分离病原体的过程既耗时又具有危险性,在布鲁茵病临床诊断实践中推广应用困难。布鲁菌病血清学诊断方法显示出较高的特异性和敏感性．但难以鉴别布鲁菌各型野毒株以及疫苗株感染。鉴于上述问题．深入开发和研制更高特异性、敏感性和稳定性的新型布鲁茵病诊断方法在兽医临床实践中势在必行。主要从细菌学、血清学和分子生物学等方面对布鲁茵病诊断方法研究情况进行了综述,以期为相关研究提供参考。     

短小乳杆菌重组S-层蛋白质的纯化及其体外黏附性的初步鉴定

以本实验室已构建的pMD19T-slp为模板,应用PCR方法亚克隆slp基因,将其定点插入到原核表达载体pGEX-4T-3中,成功构建原核表达载体pGEX-slp,经IPTG诱导获得重组融合蛋白GST-SLP并用LiCl的方法进行纯化。应用SDS-PAGE和Western blot方法对表达产物进行鉴定,应用ELISA方法鉴定重组融合蛋白的体外黏附特性。在大肠埃希菌裂解样品中,SDS-PAGE和Western blot结果均证明分子质量大小约为71ku的重组融合蛋白GST-SLP的存在;ELISA结果提示,该重组融合蛋白在体外能够有效地黏附在乳酸乳球菌NZ9000表面。本试验为S-层蛋白质生物学特性的进一步研究奠定了基础。