转基因小鼠中应用RNAi的初步探讨

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是通过双链RNA介导,特异性地降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默。近年来,利用小分子RNA(small interfering RNA,siRNA)介导的RNAi技术已越来越多的应用于哺乳动物细胞中。同时,在活体中利用RNAi研究多种生物基因功能也成为一种有效的手段。文章旨在介绍在转基因小鼠中RNAi的应用。     

四种两栖类动物皮肤分泌物的生物活性比较

抗菌肽是生物界中广泛存在的一类具有生物活性的小肽,是带正电荷的两性分子[1]。许多科学家曾认为宿主天然防御系统的主要参与者是白细胞(如肥大细胞)、血清蛋白(如补体)、吞噬细胞(如巨     

光滑爪蟾皮肤抗菌肽的分离纯化及活性检测

通过高效液相色谱法,对光滑爪蟾皮肤分泌物进行分离纯化,得到具有抗菌活性的光滑爪蟾皮肤抗菌肽。通过最小抑菌浓度（MIC）试验、溶血活性试验及癌细胞抑制试验,对其体外生物活性进行研究。结果表明,经过纯化得到2个纯度高且具有活性的抗菌肽（AMP1和AMP2）,质谱鉴定结果得出其相对分子质量分别为1 082.78和2237.34。MIC结果表明,AMP1对S.aureus ATCC25923、Escherichia coli ATCC25922的MIC值分别为23.63、8.71mg/L,对MRSA无抑菌作用。AMP2对S.aureus ATCC25923,Escherichia coli ATCC25922、MRSA的MIC值分别为4.94、10.7、86.6mg/L。溶血试验显示AMP1,AMP2具有极弱溶血活性,且对癌细胞SW480具有抑制作用。     

SPRN转基因小鼠感染Scraipe鼠适应性病毒后动物行为与脑组织形态比较

通过建立Scraipe鼠适应性病毒感染Tg(sprn-B)/C57BL/6转基因小鼠与C57BL/6野生型小鼠,观察鼠行为学及脑组织形态学的病理变化,探讨Shadoo蛋白在感染过程中对小鼠学习记忆能力及中枢神经系统的影响。结果显示在Morris水迷宫定位航行中,4~7 d转基因感染组与野生型感染组的逃避潜伏期差异极显著(P<0.01);空间探索试验中,转基因感染组与野生型感染组的第1次穿越平台时间及穿越平台次数差异极显著(P<0.01)。HE染色观察鼠脑切片发现,转基因感染组与野生型感染组相比,海马、皮质、小脑空泡数量略少,海马区锥体层细胞排列比较紧密,细胞轮廓比较完整,小脑蒲肯野氏细胞清晰明显。     

小鼠朊蛋白相关蛋白Shadoo的表达、纯化及多克隆抗体的制备

构建SPRN重组原核表达载体,并进行目的蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备,提取BALB/c小鼠全血基因组,PCR扩增SPRN基因,克隆至融合表达载体,在大肠埃希菌中表达鼠Shadoo蛋白并纯化;以纯化蛋白为抗原免疫新西兰白兔制备抗血清,并检测抗体效价,用Western blot方法分别检测与重组及内源性Shadoo蛋白的反应性.结果表明,成功制备了小鼠Shadoo蛋白兔源多克隆抗体,为研究Shadoo蛋白与PrP蛋白之间的功能调节关系,自身的生理学作用以及Shadoo蛋白在传染性海绵状脑病发病机制过程中的生物学功能奠定了良好的基础.     

SPRN转基因小鼠脏器质量和动物行为学的比较分析

采用统计学计算Tg(Mosprn-B)/C57BL/6转基因小鼠与C57BL/6野生型小鼠雌雄两性的主要脏器质量与系数,并利用水迷宫观察游泳路径及时间以探讨SPRN基因对小鼠生理结构、生长发育等影响。结果表明,相同年龄的Tg(Mosprn-B)/C57BL/6转基因小鼠,雄性的体质量及心、肺、肝、肾质量显著大于雌性(P<0.01),脑质量差异比较显著(P<0.05);比较脏器系数,脑和肝的差异比较显著(P<0.05)。与C57BL/6野生型小鼠相比较,Tg(Mosprn-B)/C57BL/6转基因小鼠脑更重(P<0.01);比较脏器系数发现,脑差异极显著(P<0.01),肺、肾、脾差异较显著(P<0.05)。水迷宫定位航行结果显示,Tg(Mosprn-B)/C57BL/6转基因小鼠的逃避潜伏期小于野生型小鼠,第4天的潜伏期具有显著差异性(P<0.05);在空间搜索试验中,Tg(Mosprn-B)/C57BL/6转基因小鼠第1次穿越平台时间小于C57BL/6野生型小鼠,穿越平台的次数大于C57BL/6野生型小鼠。     

鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备

本实验利用弗式完全佐剂和弗式不完全佐剂,乳化病毒,制备免疫抗原,对BALB/c小鼠进行三次免疫。将免疫效价达到1：10000以上的免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA方法对阳性杂交瘤细胞株进行筛选,并通过有限稀释法将呈强阳性的杂交瘤细胞亚克隆3～4次,直到杂交瘤细胞阳性率达到100%。得到阳性株命名为2E3,对阳性株细胞进行扩大培养,并将细胞注入腹腔,提取腹水,测定细胞上清及腹水的效价,分别为10×25,10×26。利用亚类鉴定试剂盒测定单抗的亚类。鉴定结果为IgG1型。