蒙古绵羊Ghrelin基因的克隆和原核表达

为了克隆蒙古绵羊Ghrelin基因,构建其原核表达载体,并检测其在大肠杆菌中的表达情况.本研究用RT-PCR方法从蒙古绵羊胃组织mRNA扩增获得Ghrelin基因的cDNA序列,克隆到pMD-19T载体后进行序列分析.将测序正确的cDNA序列与原核表达载体pET-32a(+)连接,并转化BL21( DE3)大肠杆菌.经...     

鹿茸菇研究进展

近年来,鹿茸菇因其子实体含有的鹿茸菇多糖具有抗肿瘤、降血糖血脂、抗氧化等作用,引起人们的广泛关注.因此,通过对围绕鹿茸菇人工栽培、营养成分、多糖提取、加工利用等方面的研究进展进行综述,以对鹿茸菇后续研究方向进行展望.     

利用RT-PCR技术扩增绵羊输卵管上皮细胞Ghrelin基因

提取绵羊输卵管上皮细胞总RNA,采用Primer 5.0软件设计引物,运用RT-PCR技术扩增Ghrelin基因。结果显示,经测序和序列比对鉴定,该方法成功地扩增到了大小为200 bp的目的基因,表明RT-PCR技术是检测绵羊输卵管上皮细胞中Ghrelin基因的有效手段,可为今后研究不同激素水平下绵羊输卵管组织中Ghrelin基因的表达量变化及进一步体外试验奠定基础。     

马羊膜上皮干细胞的分离培养和鉴定

通过Tryp LE消化马羊膜收集羊膜上皮细胞,经过传代培养后,用免疫荧光染色、RT-PCR及流式细胞技术(FACS)分析其干细胞特征。免疫荧光染色发现马羊膜上皮细胞表达SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81,只有少量的半贴壁细胞表达Oct4;RTPCR进一步证实马羊膜上皮细胞表达Oct4、Nanog和Sox2,而不表达STAT-3;流式细胞技术分析显示马羊膜上皮细胞也表达CD44、CD90、CD105,但不表达CD45。马羊膜上皮细胞培养三代时,平均倍增时间为(1.25±0.17)d。研究结果表明,通过Tryp LE消化马羊膜上皮可以分离获得马羊膜上皮细胞。     

荷斯坦奶牛乳腺β-防御素的差异表达

本研究为证明荷斯坦奶牛乳腺β-防御素的表达,扩增出6种β-防御素序列进行氨基酸分析,结果发现,扩增的6个保守的半胱氨酸,其核酸序列与NCBI数据库序列进行BLAST比对,结果LAP、BNBD4同源性100%,BNBD5为99.6%,EBD为99.5%, BNBD7、TAP为98.5%;实时荧光定量PCR检测6种防御素的mRNA水平的表达,它们之间的表达量都有显著性差异(BNBD4与BNBD5除外),其中LAP表达量最多,BNBD7,EBD,BNBD5,BNBD4次之,TAP的表达量最低。     

人β-防御素3在体外对小鼠淋巴细胞增殖反应的影响

为了更充分地阐明人β-防御素3(HBD3)对淋巴细胞增殖反应的影响,试验先用CCK-8对不同浓度的刀豆蛋白A(ConA)诱导的淋巴细胞增殖反应进行检测,进而筛选出最适ConA浓度,然后再用CCK-8检测不同浓度(1,10,100,500,1 000 ng/mL)的HBD3协同最适ConA浓度诱导淋巴细胞增殖反应。结果表明:ConA的最适浓度为2μg/mL;浓度为1,10,100 ng/mL的HBD3可以显著促进2μg/mL ConA诱导的淋巴细胞增殖反应,但是伴随着HBD3浓度的不断升高这一作用逐渐降低,当浓度为500 ng/mL和1 000 ng/mL时表现出一定程度的抑制作用。说明HBD3在一定浓度范围内对ConA诱导的淋巴细胞增殖反应具有促进作用,而超出这一浓度范围就会出现抑制作用。     

β-防御素在荷斯坦奶牛正常和炎性乳腺上皮细胞中的差异表达

为探讨荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞在正常和炎性2种情况下β-防御素（BNBD5）的表达量是否存在差异,本研究通过添加内毒素（LPS）建立了实验性乳房炎的乳腺上皮细胞模型,并采用实时荧光定量RT-PCR方法检测了乳腺上皮细胞中BNBD5mRNA表达水平的变化。结果显示,添加LPS后乳腺上皮细胞中炎性因子IL-6、IL-12和TNF-α的mRNA表达量与空白对照组相比显著增加（P〈0.01）,并且α-酪蛋白mRNA表达量显著降低（P〈0.01）,说明添加LPS诱发上皮细胞产生了一定的炎性反应;并且当添加LPS终质量浓度为300μg/L并培养48h之后BNBD5的表达量最高,与空白对照组存在极显著差异（P〈0.01）;推测BNBD5基因可能参与了由LPS诱发的奶牛乳房炎的防御机制。