猪耳组织DNA的快速提取

采用一步法提取的猪基因组DNA,可直接用于PCR扩增、单链构象多态性(SSCP)分析及测序。操作步骤为:采取新鲜猪耳组织2～10mg,蛋白酶K消化,55℃1h,滤纸过滤消化产物。取孔径为1.2mm的滤纸(含有足量的DNA)作为模板进行PCR扩增。结果表明,提取的基因组DNA质量较高,PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和SSCP分析后可见清晰的条带,可进一步用于克隆测序。滤纸上的DNA干燥后可常温保存。该方法简单、快速,成本低,效率高,适用于大批量的基因分型,也可用于提取不同组织的基因组DNA。     

韩国猪场的猪诺如病毒和札如病毒

猪诺如病毒（NoVs）和札如病毒（SaVs），同属于杯状病毒科，是引起人类感染的潜在动物病原体，常见于亚洲国家。本研究从韩国64个猪场收集了537份猪类样，经半巢式RT-PCR检测结果发现，其中10份（1．9％）含有猪诺如病毒（NoVs）；经RT-PCR检测结果发现，其中60份（11．2％）含有札如病毒（SaVs），从而表明，韩国猪场中存在这两种病毒的感染。     

转基因技术在家畜研究上的应用

转基因技术是现代生物技术中一个重要的研究领域,是21世纪生物技术发展的热点之一,目前已有转基因猪、牛、羊等多种转基因动物问世。笔者对动物转基因研究方法以及其在家畜研究上的应用进行了综述,同时指出了转基因动物还存在的问题,最后就其未来发展前景进行了展望。     

猪microRNAs的克隆、鉴定及表达分析

MicroRNAs（miRNAs）是一种长11~22 nt,具有调节作用的小分子RNA,可通过抑制蛋白质的合成和降解mRNAs来沉默靶基因。猪因具有产肉特性,成为了农业生产中一种重要的动物,此外,由于其与人类的亲缘关系较近,与小鼠模型相比,猪更具有作为模型组织的巨大的生物医学重要性。到目前为止,在哺乳动物中（如人、老鼠等）已鉴定出数百个miRNAs,但猪基因组中的miRNAs研究却较少。因此,本试验对猪不同组织中的保守miRNAs进行了鉴定,并对其表达模式进行了分析。通过对猪心脏、肝脏和胸腺中提取的混合RNA进行测序,构建了一个小RNA基因库,在该基因库中共鉴定出了120个保守的miRNA。对14个不同组织中的保守miRNAs进行表达分析。结果表明,miR-499和miR-208在心脏中特定表达,miR-122在肝脏中特定表达。除此之外,miR-1和miR-133、miR-181a和miR-142-3p、miR-194、miR-143在心脏、胸腺、肝脏和胃中均有较高的表达水平;miR-22、miR-26b、miR-29c和miR-30c在不同的猪组织中均有表达。猪不同组织中特定的miRNAs表达模式并不相同。 因此,本研究鉴定出了120个miRNAs,并对其在猪不同组织中的特定表达进行了检测,为对猪和一些相关的哺乳动物（包括人）转录后的基因调控感兴趣的分子生物学家、育种工作者、生物医学研究者提供了宝贵的资料。     

1株体内低水平复制的牛白血病病毒株的全基因组序列

选取持续血清媒介物、低病毒载量牛白血病病毒（BLV）感染的阿根廷荷斯坦奶牛的外周血单核细胞,接种BLV株后,经体内感染获得羔羊淋巴细胞并提取基因组DNA。以包含完整BLV病毒的DNA序列设计一组重叠引物进行PCR扩增。扩增的BLV ARG 41 DNA产物经克隆、测序,所获序列与其他的BLV序列（包括一株从阿根廷相同种群中获得的体内高复制病毒株BLV ARG 38）进行比对。本研究还对BLV ARG 41推导蛋白的特性及与逆转录病毒PTLV／BLV属其他种群间的关系进行了探讨。     

印度南部山羊品种遗传多样性及遗传关系的微卫星分析

本研究利用微卫星标记分析了印度南部山羊品种间的遗传多样性及遗传关系。试验采集了印度南部的5个山羊品种(Attappady山羊、Osmanabadi山羊、Sangamneri山羊、Malabari山羊、Kanniadu山羊)及印度东部的1个山羊品种(Ganjam山羊)共288份DNA样品,在25个微卫星位点共检测到190个等位基因。Kanniadu山羊的遗传多样性最为丰富(0.73),Osmanabadi山羊遗传多样性最低(0.61)。Ganjam山羊与Malabari山羊遗传距离最近,为0.22;Kanniadu山羊与Malabari山羊遗传距离最远,为0.83。不同山羊品种间的遗传差异度显然不等于零。所有品种中的大多数位点为杂合子,Fis值为0.20,为中度近交。主成分分析结果表明,山羊品种的聚类取决于地理位置。在制定这些山羊品种的保种方案时应考虑其地理起源。     

一株新型猪细小病毒的鉴定和分子克隆

在与猪圆环病毒2型混合感染的患病猪肺泡灌洗液中鉴定出一株新型的猪细小病毒,命名为PPV4,该病毒与牛细小病毒2型同源性较小,与编码ORF3的Bocavir-us属(如牛细小病毒、犬细小病毒和人bocavirus等)同源性较高。PPV4的ORF3编码一个含204个氨基酸残基的蛋白质,与bocaviruses的ORF3编码蛋白质的大小类似;而bocaviruses的ORF3编码蛋白质相互间相似性较高,PPV4的ORF3编码蛋白质与GenBank非冗余蛋白质数据库中的蛋白质无同源性。     

土耳其小反刍动物感染的边界病病毒（BDV）是一个新的BDV亚型

绵、山羊血样采自土耳其的艾丁和布尔杜尔省的8个小反刍动物群,应用抗原捕获ELISA法检测其是否感染边界病病毒。对临床诊断为患病的羔羊,记录其病理和免疫组化特征。阳性BDV羔羊的尸检结果显示为,被毛异常,低髓鞘形成的非化脓性脑脊髓炎引发了后肢麻痹。免疫组化检测结果发现,脑的所有部分（包括小脑、大脑半球和中脑）都有边界病病毒抗原存在。     

饲喂富硒酵母后猪肉的持水量加强与Sepw1基因表达增强的相关性研究

试验选取7周龄、体重(10.30±0.68)kg的缺硒猪30头,随机分为3组,分别饲喂添加0、0.3、3.0 mg/kg富硒酵母(SeY)的基础日粮,研究SeY对硒蛋白基因表达的影响,以及基因表达和抗氧化成分、肉品质之间的相关性,试验期8周。结果发现,日粮中添加SeY可提高肌肉的抗氧化成分;且随着日粮中SeY含量的增加,滴水损失和肌肉中的硫代巴比妥酸反应底物浓缩物含量显著降低(P<0.05);12个硒蛋白基因中肌肉Sepw1基因的mRNA表达水平极显著升高(P<0.01)。统计结果发现,滴水损失与Sepw1基因mRNA表达水平呈负相关。说明肌肉持水量增加与Sepw1基因表达增强有一定的相关性。     

猪对氧磷酶3（PON3）基因的分子特性和表达分析

对氧磷酶（PON）基因家族有PON1、PON2和PON33个成员，具有抗氧化应激的作用，与血脂异常、糖尿病和冠心病等发病有密切的关系。虽然PON3是PON家族中发现最晚、研究最少的，但近来研究结果发现，在PON3转基因小鼠中，PON3能明显减缓动脉粥样硬化病和肥胖症的形成。因此，本研究描述了猪PON3基因的cDNA编码区的分离和分子特性，克隆了由外显子交替剪接而形成的3个猪PON3转录突变体。结果表明，PON3的mRNA和蛋白质在猪的所有组织中均可表达；而且，与大白猪瘦肉型品系母猪相比，