青岛地区兔肺炎克雷伯氏菌分离鉴定

对青岛地区某兔场病死兔的病变器官组织进行细菌分离和纯培养,对所分离的细菌进行形态特征、理化性质和16SrRNA序列的分子鉴定和测序,人工感染以及药敏试验,判定为肺炎克雷伯氏菌。代表菌株16SrRNA序列长度1414bp,与GeneBank登录号为EU360123.1的肺炎克雷伯氏菌16SrRNA序列同源性100%,人工感染小鼠24h全部死亡,对供试的诺氟沙星等药物高度敏感,对供试的强力霉素等中毒敏感,对头孢拉定等耐药。应用筛选的敏感药物,并采取综合防治措施,使疫情得到了有效控制。     

产气荚膜梭菌ε毒素蛋白高效表达体系的构建及其免疫保护性的研究

ε毒素是由B和D型产气荚膜梭菌产生的,能够引起牛、羊肠毒血症,给畜牧业造成巨大的经济损失。本试验将ε毒素基因片段(972 bp)以正确的阅读框架定向连接到pET-28a(+)质粒上,然后将重组质粒导入受体菌株,成功构建重组菌株BL21(DE3)。SDS-PAGE和Western blotting检测结果表明,重组的菌株BL21(DE3)能以包涵体的形式高效表达ε毒素(占菌体总蛋白的32.83%)。在此基础上,用有效剂量0.2 mg包涵体粗提物免疫家兔,抗血清间接ELISA检测结果显示,在第4周抗体效价达到最高值为8.7log2。因此,在本研究中构建的重组菌株BL21(DE3)能高效表达ε毒素,而且该毒素具有较高的免疫保护性。     

青岛地区兔源产气荚膜梭菌的分离鉴定及遗传多样性分析

兔的梭菌性肠炎是由产气荚膜梭菌感染引起的严重危害养兔业的一种疾病,为了更好地控制此病,本研究调查了青岛地区规模化兔场爆发此病时产气荚膜梭菌的毒素型及遗传多样性。2010年11月-2012年5月期间,采集青岛地区规模化养兔场疑似产气荚膜梭菌感染兔的肝脏进行产气荚膜梭菌的分离鉴定,采用Multiple—PCR方法对分离菌株进行毒素型分析,应用ERIC-PCR方法分析分离菌株的遗传多样性。共分离到25株产气荚膜梭菌,其中A型24株（96％）,C型1株（4％）。用ERIC—PCR方法将25株分离株分于9个聚类中,其中V型为主要流行型。结果表明：青岛地区规模化兔场中产气荚膜梭菌流行的毒素型主要为A型,且具有多种基因亚型,其中V型为主要流行型。此结果为该地区兔产气荚膜梭菌病的免疫和微生态防治提供了重要的参考依据。