运行人员处理“天兔”台风通信故障

2013年9月22日晚间，台风“天兔”在汕尾登陆。本文简要概述了在台风侵袭的过程中汕尾电网遭受到的通信危害以处理措施，同时探讨了台风“天兔”登陆之前汕尾的电力通信网相应的运行状况以及应对措施，最后对通信事故处理进行了总结并分析了运行人员应该如何处理“天兔”台风通信事故，以供同行参考。     

山羊GATA3基因克隆及其真核表达载体构建

本研究旨在克隆山羊GATA3(GATA binding protein 3)基因,构建其真核表达载体,并对该基因进行生物信息学分析。以山羊GATA3基因编码区为种子序列(GenBank登录号:XM_018056969.1),通过SnapGene 4.1.9软件设计引物序列,应用RT-PCR方法扩增山羊GATA3基因完整编码区序列,测序鉴定后基于其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,并构建pLVX-GATA3-IRES-ZsGreen1慢病毒重组质粒。利用脂质体转染方法将慢病毒重组质粒pLVX-GATA3-IRES-ZsGreen1与病毒包膜质粒pCMV-VSVG、包装质粒pNRF共转染HEK-293T细胞,进行慢病毒包装后收集病毒上清液,成功感染山羊耳尖成纤维细胞。结果显示,山羊GATA3基因编码区序列全长1335 bp,编码444个氨基酸,分子质量为47.94 ku,分子式为C2093H3234N626O625S24,等电点为9.47,其中丝氨酸含量最高(13.3%),色氨酸含量最低(1.1%)。山羊GATA3基因核苷酸序列与牛、猪、驴、马、小鼠及人的相似性分别为97.7%、94.2%、92.2%、92.4%、88.0%和90.1%,不同物种间相似性较高,进化过程中具有高度保守性。系统进化树分析表明,山羊与牛、猪、驴、马及人聚为一支,亲缘关系较近,与非洲蟾蜍、斑马鱼亲缘关系较远。跨膜结构域及亲/疏水性预测结果显示,山羊GATA3蛋白不存在跨膜结构域,为亲水性蛋白。信号肽预测结果表明,该蛋白定位于细胞质中。通过构建山羊GATA3基因慢病毒真核表达载体pLVX-GATA3-IRES-ZsGreen1,细胞水平上转染HEK-293T和山羊耳尖成纤维细胞,过表达GATA3基因,产生绿色荧光信号。本研究结果为山羊GATA3基因功能的研究提供了参考依据,为后续探究GATA3基因在山羊泌乳中的作用奠定了基础。     

抑制miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞泌乳功能的影响

【目的】探索miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞（chemical induced mammary epithelial cells,CiMECs）体外泌乳功能的调节作用,旨在为促进转基因乳腺生物反应器的发展以及"培养皿奶"的商业化生产奠定基础和提供新的思路。【方法】选取奶山羊耳缘成纤维细胞（GEFs）为研究材料,经单一小分子化合物TGFβR-1/ALK5的抑制剂（RepSox）诱导8 d后,分别从细胞的形态变化、特异性标记物免疫荧光染色以及油红O染色对其进行鉴定。之后运用脂质体转染技术在诱导成功的奶山羊CiMECs中分别转染miR-142-3p的抑制物（miR-142-3p inhibitor）及抑制物对照（inhibitor-NC）,不转染的细胞作为空白对照（BC）,转染24 h后,采用实时荧光定量PCR检测miR-142-3p的表达水平,CCK-8法检测细胞的增殖率,Western blotting检测β-酪蛋白（β-casein）的表达量,甘油三酯酶法测定甘油三酯的含量。【结果】GEFs诱导8 d后形成岛屿状多核仁样的上皮样聚集;免疫荧光染色结果显示,诱导后的GEFs表达乳腺上皮细胞（MECs）的特异性标记物细胞角蛋白14（CK14）和CK18;油红O染色结果显示,诱导后的GEFs细胞质内弥散分布着大小不等被染上红色的脂滴,表明成功获得了具有泌乳功能的奶山羊CiMECs。奶山羊CiMECs转染试验结果显示,与空白对照组相比,miR-142-3p inhibitor组miR-142-3p的相对表达量显著降低（P<0.05）,inhibitor-NC组miR-142-3p表达量无显著差异（P>0.05）;miR-142-3p inhibitor组奶山羊CiMECs的增殖率、β-casein表达量及甘油三酯分泌量均显著增加（P<0.05）,inhibitor-NC组奶山羊CiMECs的增殖率、β-casein表达量及甘油三酯分泌量均无显著差异（P>0.05）。【结论】GEFs经RepSox诱导8 d可成功转变为具有泌乳功能的奶山羊CiMECs,抑制miR-142-3p可显著促进奶山羊CiMECs的增殖并增加β-casein表达量及甘油三酯的分泌量,从而影响泌乳功能。     

建立辽宁省民族地区农民科技服务协会的思考

农民协会建立是中国市场经济发展到一定阶段必然要出现的一种社会现象。辽宁省民族地区建立农民协会具有必要性和可能性。政府部门要发挥引导、宣传、服务的作用,为农民协会的建立和发展创造良好的环境。     

山羊GATA3基因克隆及其真核表达载体构建

本研究旨在克隆山羊GATA3（GATA binding protein 3）基因,构建其真核表达载体,并对该基因进行生物信息学分析。以山羊GATA3基因编码区为种子序列（GenBank登录号：XM_018056969.1）,通过SnapGene 4.1.9软件设计引物序列,应用RT-PCR方法扩增山羊GATA3基因完整编码区序列,测序鉴定后基于其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,并构建pLVX-GATA3-IRES-ZsGreen1慢病毒重组质粒。利用脂质体转染方法将慢病毒重组质粒pLVX-GATA3-IRES-ZsGreen1与病毒包膜质粒pCMV-VSVG、包装质粒pNRF共转染HEK-293T细胞,进行慢病毒包装后收集病毒上清液,成功感染山羊耳尖成纤维细胞。结果显示,山羊GATA3基因编码区序列全长1 335 bp,编码444个氨基酸,分子质量为47.94 ku,分子式为C₂₀₉₃H₃₂₃₄N₆₂₆O₆₂₅S₂₄,等电点为9.47,其中丝氨酸含量最高（13.3%）,色氨酸含量最低（1.1%）。山羊GATA3基因核苷酸序列与牛、猪、驴、马、小鼠及人的相似性分别为97.7%、94.2%、92.2%、92.4%、88.0%和90.1%,不同物种间相似性较高,进化过程中具有高度保守性。系统进化树分析表明,山羊与牛、猪、驴、马及人聚为一支,亲缘关系较近,与非洲蟾蜍、斑马鱼亲缘关系较远。跨膜结构域及亲/疏水性预测结果显示,山羊GATA3蛋白不存在跨膜结构域,为亲水性蛋白。信号肽预测结果表明,该蛋白定位于细胞质中。通过构建山羊GATA3基因慢病毒真核表达载体pLVX-GATA3-IRES-ZsGreen1,细胞水平上转染HEK-293T和山羊耳尖成纤维细胞,过表达GATA3基因,产生绿色荧光信号。本研究结果为山羊GATA3基因功能的研究提供了参考依据,为后续探究GATA3基因在山羊泌乳中的作用奠定了基础。     

运行人员处理“天兔”台风通信故障

2013年9月22日晚间,台风"天兔"在汕尾登陆。本文简要概述了在台风侵袭的过程中汕尾电网遭受到的通信危害以处理措施,同时探讨了台风"天兔"登陆之前汕尾的电力通信网相应的运行状况以及应对措施,最后对通信事故处理进行了总结并分析了运行人员应该如何处理"天兔"台风通信事故,以供同行参考。     

山羊乳腺上皮细胞重编程过程中细胞上清液外泌体不同提取方法的比较

为了比较不同方法提取山羊乳腺上皮细胞重编程过程中细胞上清液外泌体的效果，试验采用超速离心法和试剂盒法提取细胞上清液中的外泌体，利用透射电子显微镜观察外泌体形态，以纳米流式仪检测外泌体浓度和粒径，Western-blot法检测外泌体表面标志物蛋白并通过Image J软件分析其相对表达量。结果表明：超速离心法和试剂盒法提取的外泌体均具有圆盘状的双层膜结构，且轮廓清晰，但是试剂盒法提取的外泌体中存在其他蛋白质颗粒。超速离心法提取获得的外泌体较为分散，外泌体粒径集中在55～60 nm之间；试剂盒法提取获得的外泌体大小更为均一，外泌体粒径集中在58 nm左右。两种方法提取的外泌体表面特异性标志物CD63和TSG101蛋白均呈阳性。试剂盒法提取的外泌体浓度极显著高于超速离心法(P<0.01),提取的外泌体表面特异性标志物CD63和TSG101蛋白相对表达量也极显著高于超速离心法(P<0.01)。说明超速离心法和试剂盒法均可以从山羊乳腺上皮细胞重编程过程的细胞上清液中提取出外泌体，区别在于超速离心法提取的外泌体纯度更高，试剂盒法提取的外泌体浓度更高。     

通过Forskolin将小鼠成纤维细胞重编程为神经元试验

为了给临床神经退行性疾病治疗提供有应用价值的方法、突破试验不能转化为临床这一瓶颈，试验通过使用单一小分子化合物Forskolin调控小鼠成纤维细胞命运的方法，使其重编程为神经元，并进行了RT-qPCR、免疫荧光检测。结果表明：经诱导后的神经元表现出典型的神经元形态；RT-qPCR结果显示神经元相关基因表达上调，成纤维相关基因表达下调；免疫荧光结果显示，诱导神经元的神经元相关蛋白TUJ1、MAP2的表达呈阳性。说明使用Forskolin替代转录因子在体外可以实现将小鼠成纤维细胞直接重编程为神经元，应用此成果可在临床治疗上避免外来遗传物介入导致的致瘤致病风险。