21日龄断奶对仔猪肠道形态、肠道通透性及肠黏膜屏障的影响

本试验旨在研究21日龄断奶对仔猪肠道形态、肠道通透性及肠黏膜屏障的影响。采用2×3双因子完全随机试验设计,组别(哺乳组、断奶组)和日龄(22、24和28日龄)为2个主效应。选取6窝体况相近的健康大白仔猪,每窝选取6头平均体重为(6.1±0.2)kg的仔猪,随机分为2组,分别为断奶组和哺乳组,每组18头,分别于22、24和28日龄时屠宰,测定其生长性能、肠道形态、肠道通透性及肠黏膜屏障。结果表明:1)28日龄时,断奶组仔猪的末重和平均日增重均极显著低于哺乳组(P0.01)。2)组别和日龄对仔猪的空肠隐窝深度和绒毛高度/隐窝深度、回肠绒毛高度有极显著交互作用(P0.01);断奶组的空肠、回肠隐窝深度极显著高于哺乳组(P0.01),空肠、回肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度极显著低于哺乳组(P0.01);哺乳组28日龄时的空肠绒毛高度/隐窝深度极显著高于22和24日龄时(P0.01),24日龄时的回肠绒毛高度极显著高于22日龄时(P0.01)。3)组别和日龄对仔猪的空肠黏膜二胺氧化酶(DAO)活性有显著交互作用(P0.05),断奶组的空肠、回肠黏膜DAO活性显著低于哺乳组(P0.05)。4)组别和日龄对仔猪空肠黏膜闭锁蛋白(occludin)的mRNA表达量有极显著交互作用(P0.01);空肠黏膜闭锁小带蛋白1(ZO-1)和哺乳组空肠黏膜occludin的mRNA表达量随着日龄的增加先升高后降低(P0.05);与哺乳组相比,断奶组回肠黏膜ZO-1、occludin和24日龄时空肠黏膜occludin的mRNA表达量显著降低(P0.05);24日龄时回肠黏膜ZO-1的mRNA表达量显著高于22日龄时(P0.05)。5)组别和日龄对仔猪空肠黏膜肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达量有显著交互作用(P0.05);断奶组24和28日龄时空肠黏膜TNF-α的mRNA表达量显著高于哺乳组(P0.05),空肠黏膜白细胞介素10(IL-10)的mRNA表达量显著低于哺乳组(P0.05)。回肠黏膜白细胞介素1β(IL-1β)的mRNA表达量随着日龄的增加而降低(P0.05)。综上所述,哺乳仔猪22~28日龄时肠道发育趋于成熟,而断奶会破坏仔猪肠道上皮细胞的结构和紧密连接蛋白的mRNA表达,引起肠道绒毛变短和脱落、肠道通透性增加和炎症反应,降低平均日增重。     

研究肠道糖基化修饰的荧光凝集素免疫组化方法建立

糖基化修饰是生命体中最重要的一种蛋白质翻译后修饰之一，对生命体起着非常重要的作用。糖蛋白上的糖基可以作为凝集素的结合位点，因此凝集素可以用来鉴别和分析糖链结构，作为糖基化分析方法如质谱法的重要补充。本试验旨在建立和优化研究猪肠道糖基化修饰的荧光凝集素免疫组化方法，并应用该方法研究猪不同肠段糖基化修饰的差异以及断奶对仔猪肠道糖基化修饰的影响。结果表明：①荧光凝集素免疫组化方法最适条件为：切片脱蜡后，封闭切片30 min，采用5 μg/mL FITC标记植物凝集素（FITC-Lectin）室温孵育1 h，以含有DAPI的封片剂进行封片。该方法具有灵敏度高、特异性好以及定量更为多元化的特点。②生长猪回肠和结肠中糖基化修饰模式不同，回肠主要以岩藻糖、N-乙酰葡萄糖胺为主，而结肠中主要以N-乙酰葡萄糖胺、岩藻糖和甘露糖为主。除甘露糖分布在非杯状细胞的肠上皮细胞和固有层外，岩藻糖和N-乙酰葡萄糖胺主要分布在肠绒毛表面和杯状细胞中。③22~28日龄仔猪回肠中N-乙酰葡萄糖胺的含量随着仔猪日龄的增加而增加（P<0.05），断奶显著降低了28日龄仔猪回肠中N-乙酰葡萄糖胺的含量（P<0.05）。综上所述，本研究成功建立猪肠道糖基化修饰的研究方法，并通过此方法发现仔猪回肠中N-乙酰葡萄糖胺可作为肠道屏障功能完善的标志之一。     

食糜样本中11种生物胺同步检测方法的建立

旨在建立一种利用液质联用（liquid chromatography mass spectrometry,LC-MS）技术实现对猪肠道食糜中多种生物胺进行同步检测的方法。试验首先优化了丹磺酰氯（dansyl chloride,DNS）对生物胺的衍生条件,并进一步确定了肠道食糜样品中生物胺的最佳净化方法。结果显示,衍生条件在衍生剂浓度为8 mg·mL^-1,衍生温度为40℃的条件下,衍生90 min为最佳。生物胺净化方法确定为先用乙酸乙酯进行提取,衍生结束后再用乙酸乙酯进行萃取的组合方式提取生物胺的效果最好;11种生物胺在5～1 000 μg·L^-1的质量浓度范围内定量结果呈良好的线性关系（R²>0.99）,检出限和定量限分别为0.01～0.23 μg·L^-1和0.03～0.76 μg·L^-1;各生物胺的日内相对标准偏差在0.73%～ 7.92%,日间相对标准偏差在0.07%～8.67%。最后采用本方法对仔猪回肠、盲肠、结肠和直肠食糜样品中的生物胺进行检测,初步确定了11种生物胺在不同肠段食糜中的含量分布。通过对仔猪回肠、盲肠、结肠和直肠中的食糜样品进行检测,发现食糜中的生物胺主要为亚精胺、腐胺、尸胺、精胺和组胺,而酪胺、1,7-二氨基庚烷、5-羟色胺和胍基丁胺4种生物胺含量较少,色胺和苯乙胺未检出。综上所述,本试验建立的方法具有结果准确、灵敏度高、重现性好等优点,可用于仔猪不同肠道段食糜中多种生物胺的同步检测。     

干湿交替下黄土区苜蓿根系抗拔力学性能

[目的]研究黄土区干湿交替过程对草本植物根系抗拔力学性能的影响，以期为草本植物根系固土护坡工程提供一定的理论支持和依据。[方法]选取紫花苜蓿为研究对象，采用重塑土根系拉拔试验，研究苜蓿根系抗拔力学性能及其与根径、根长、土壤容重、干湿交替作用等影响因素的关系。[结果](1)苜蓿根系抗拔力学性能指标与根径、根长和土壤容重存在幂函数或指数函数关系。(2)相比未干湿交替试样，干湿交替试样根系抗拔力学性能指标均显著减小。(3)砂壤土中苜蓿根系抗拔力学性能指标均优于壤土，且干湿交替在砂壤土中对苜蓿根系抗拔力学性能指标的影响小于在壤土中的影响。(4)根径、根长及容重和干湿交替的耦合作用对根系抗拔力学性能指标有显著影响。[结论]在干湿交替作用下，根径、根长和土壤容重对苜蓿根系抗拔力学性能有一定影响。