利用PRNP-/-羊制备朊蛋白多克隆抗体及其特性分析

【目的】利用朊蛋白双基因敲除（PRNP-/-）羊制备朊蛋白多克隆抗体,并对其特性进行分析。【方法】构建山羊朊蛋白（PrP）原核表达载体,转入大肠杆菌并诱导表达,纯化获得羊PrP;将获得的PrP免疫PRNP-/-山羊,制备朊蛋白特异性的多克隆抗体;并对获得的朊蛋白多克隆抗体进行ELISA及Western-blot检测。【结果】获得了大量的朊蛋白特异性抗血清,间接ELASA检测抗血清中朊蛋白多克隆抗体的效价为25600;Western-blot检测显示所制备抗体不仅可以识别鼠、牛、羊脑组织内源性朊蛋白,而且能识别鼠脑组织内朊病毒。【结论】PRNP-/-转基因山羊可用于制备大量高亲和力朊蛋白多克隆抗体,获得的抗体可用于多种动物朊蛋白及朊病毒类疾病的检测。     

PCR方法鉴别猪、禽来源的血浆蛋白粉

试验利用多聚酶链式反应(PCR)检测不同动物来源的血浆蛋白粉,以动物血浆蛋白粉的基因组DNA为模板,并设计猪、鸡线粒体特异性引物,进行PCR特异性检测与敏感性分析,获得最佳的PCR检测条件。试验结果表明,所设计引物特异性良好,敏感性高达到5%。文章建立了一种快速、灵敏、可靠的动物血浆蛋白粉来源检测技术,对于提高饲料原料安全性和制定相关饲料标准法规等具有重要意义。     

hLF转基因羊繁殖、遗传与表达稳定性

【目的】分析转基因对人乳铁蛋白（human Lactoferrin,hLF）转基因羊繁殖性能的影响,及转基因在不同世代中的遗传与表达稳定性。【方法】应用自主研发的原代hLF转基因山羊（G0代公羊）建系,与普通奶山羊常规交配获得F1代;F1代公羊与F1、F2代母羊或普通奶山羊（N）交配获得F2代;F2代公羊与F2代母羊交配获得F3代。分别采用PCR和ELISA方法对其后代个体进行整合与表达鉴定;统计各世代不同配种方式所获得的后代数量、转基因整合率、母羊受胎率、羔羊异常率等繁殖性能数据。【结果】经过多个繁殖周期,各世代转基因羊受胎率、产羔率等繁殖性状均正常。获得F1代hLF羊19只,转基因整合率为24.7%（19/77）;F2代hLF羊86只,其中通过（F1♂×N♀）交配方式获得的是62只,转基因整合率为33.2%（62/187）;通过（F1♂×F1♀）交配方式获得hLF羊16只,转基因整合率为76.2%（16/21）;通过（F1♂×F2♀）交配方式获得hLF羊8只,转基因整合率为34.8%（8/23）;获得F3代hLF羊9只,转基因整合率为52.9%（9/17）。ELISA方法测定F1、F2、F3代羊泌乳20周乳汁中hLF的表达发现,hLF在转基因羊乳汁中稳定表达,3个世代hLF羊乳中的平均表达量分别为351.75、340.00和326.25 μg•mL-1。【结论】hLF基因的转入未对转基因羊群的繁殖性能产生显著影响,hLF基因能在山羊群体世代间稳定遗传和表达。