小分子化合物促进猪iPSCs primed向naive状态转化的研究

为了探讨在培养体系中添加小分子化合物对Dox-inducible体系诱导获得的猪i PSCs primed向m ESC-like(naive)状态转化的影响,进而筛选出能够促进猪i PSCs primed向naive状态转化的稳定培养体系,试验采用添加小分子化合物的处理组naive转化培养体系[基础培养基+CHIR99021(3μmol/L)+PD0325901(1μmol/L)+LPA(10μmol/L)+LIF(10 ng/m L)+b FGF(4 ng/m L)+β-巯基乙醇+L-谷氨酰胺+非必需氨基酸+Dox(2μg/m L)]处理猪i PSCs,同时以DMEM/F12+Dox作为对照,对传代培养的i PSCs进行碱性磷酸酶活性、免疫荧光、qRT-PCR检测,以此来探讨此培养体系对i PSCs向naive状态转化的影响。结果表明:与对照组(DMEM/F12+Dox)克隆相比,处理组在形态上更为立体,边缘光滑清晰,碱性磷酸酶活性更高,免疫荧光检测显示多能性基因OCT4、表面特异性抗原SSEA-4及组蛋白H3K4me3的相对荧光强度显著高于对照组,naive相关基因ESRRB、STELLA、SOX2、OCT4的相对表达量显著提高。说明该体系对猪i PSCs primed向naive状态转化有一定的促进作用。