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通过PCR方法克隆了从我国哈尔滨分离的一株鸡贫血病毒(CAV)的VP2基因,并对之进行了测序,该基因的开放读码框由65bp组成,编码216个氨基酸。通过将本次克隆的基因与GenBank收录的CAV的VP2基因比较,同源性至少为99%,未发现与本次克隆的VP2蛋白完全一致的CAV分离株,与之同源性最好的是CIA-1的VP2蛋白,相差1个氨基酸,与Cux-1也仅相差2个氨基酸,因此从该蛋白看CAV哈尔滨分离株的变异程度不很高。比较这27株病毒的VP2及其基因序列,发现共有31处核苷酸发生变异,这些变异将导致VP2的12个氨基酸变化,尽管他们散布于整个VP2,但在186到191号氨基酸区域存在一个没有报道过的变异程度相对较高的区域,CAV的VP2是相对较保守的蛋白。 相似文献
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鸡贫血病毒vp3基因克隆、序列分析和比较 总被引:2,自引:0,他引:2
克隆了从我国哈尔滨分离的一株鸡贫血病毒(CAV)的vp3基因,并对之进行了测序。该基因的开放读码枢由366bp组成,编码121个氨基酸,氨基酸组成具有已报道VP3的典型特点。本次克隆的基因与GenBank收录的CAV的vp3基因进行序列比较,同源性至少为98%。与国内报道的山东株SJ1的vp3基因有3个核苷酸的差异,表明国内的CAV毒株已经产生了一些分化。在EMBL中比较本次克隆的VP3蛋白一级结构,与之差异最大的是马来西亚分离株的VP3,有5个氨基酸残基不同,同源性为96%。同时收集EMBL中的CAV的VP3蛋白绘制进化树,我国哈尔滨分离的CAV毒株与CIA进化关系最近,而与Cux-1的2个衍生株QDWX1、QDWX3进化关系最远。这些结果进一步证明了CAV在遗传方面是较保守的病毒,来自哈尔滨的CAV不是CAV的一个独立分支。 相似文献
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【目的】应用大肠杆菌表达系统表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV) E0蛋白,纯化后免疫小鼠制备E0蛋白多克隆抗体用于BVDV的检测技术研究。【方法】采用PCR扩增BVDV的E0基因,将其连接至pET-28a (+)构建重组表达载体pET28a-E0。将重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导、亲和层析纯化后,通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定E0蛋白的表达情况。将纯化的E0蛋白免疫小鼠制备BVDV E0多克隆抗体,并通过Western blotting、细胞免疫荧光试验、ELISA等试验检测该多克隆抗体的特异性和效价,以及在BVDV检测中的应用。【结果】成功构建原核表达载体pET28a-E0,表达并纯化E0蛋白,制备的BVDV E0多克隆抗体可特异性识别纯化的E0蛋白及pET28a-E0在BL21中表达的总蛋白。进一步Western blotting、细胞免疫荧光试验、双抗夹心法ELISA证明制备的E0多克隆抗体可用于BVDV的检测。间接ELISA结果表明,E0多克隆抗体效价高于1∶64 000。【结论】制备的BVDV E0多克隆抗体效价高、抗原结合特异性强,为BVDV E0蛋白的生物学功能研究及BVDV的检测提供了材料支持。 相似文献
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