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1.
非洲猪瘟间接ELISA诊断试剂盒的研究   总被引:12,自引:6,他引:6  
用带有编码非洲猪瘟病毒衣壳蛋白P72 基因的重组杆状病毒(Bacp72)作载体,在sf9细胞中表达并得到重组P72蛋白,SDS-PAGE可得到分子量在 72kDa左右的电泳带。用标准阳性非洲猪瘟血清对 P72蛋白进行 ELISA检测,证明该蛋白具有生物学活性。用P72作为间接法的包被抗原,对ELISA反应条件进行了优化。确定最佳包被液为PBS(pH7.2)、最佳封闭液为1%PCT、最佳血清稀释液为4%PEG6000/PBS、最佳冲洗液为0.5M NaCl/0.5%Tween-20/PBS(pH7.2)。本实验反应体系采用50μl的微量法,可节约试剂及抗原。反应在2小时内即可完成,达到了快速诊断的目的。包被了抗原并用封闭液封闭后的酶标板密封后保存于-20℃的冰箱中,至少可以保存5个月。阻断试验和交叉试验表明ELISA法有良好的特异性。间接ELISA比Dot-ELISA法具有更高的灵敏性。血清学调查没有得到阳性结果,与我国实际情况相符。用Bacp72表达的非洲猪瘟病毒P72蛋白抗原作为间接ELISA的检测抗原来检测非洲猪瘟血清具有快速、简单、无感染的特点。本实验为非洲猪瘟ELISA检测试剂盒的最终组装提供了实验依据。  相似文献
2.
用ELISA检测猪链球菌病血清抗体(初报)   总被引:10,自引:1,他引:9  
以2.5%NaCl浸提猪链球菌荚膜多糖抗原,选用2%明胶作封闭液,4%PEG-PBS为血清稀释液,用ELISA检测猪链球菌病血清抗体,特异性强,比琼扩敏感25-250倍,简便快速,在本病诊断、检疫中有一定实用价值。  相似文献
3.
根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的基因组核苷酸序列,在S基因(纤突蛋白基因)5′端保守区设计了一对引物P3/P4,该对引物在TGEV扩增跨幅约为2.4kb;而PRCV由于在此区域存在一约0.6kb碱基缺失,扩增跨幅约为1.8kb。用引物P3/P4对TGEV Miller株、Purdue株和PRCV AR310株分别进行RT-PCR,根据RT-PCR扩增片段大小可以直接区分TGEV和PRCV。用引物P3/P4与引物P1/P2作Nested-PCR,提高了该RT-PCR的特异性和敏感性,建立的RT-PCR可为临床上诊断TGEV及调查我国是否存在PRCV感染提供可靠的鉴别手段。  相似文献
4.
用ELISA检测猪细小病毒(PPV)血清抗体   总被引:7,自引:0,他引:7  
采用差速离心、透析、聚乙二醇(PEG)浓缩方法纯化猪细小病毒(PPVDK7113)制备抗原。用纯化的PPV抗原包被聚苯乙烯微量反应板,建立了检测PPV血清抗体的间接ELISA。抗原最佳包被浓度为6.3μg/ml,被检血清最佳稀释度为1:200。用建立的ELISA检测山东、东北、广东等地的426份血清,结果阳性率为36.2%。与华中农大病毒室提供的猪细小病毒乳胶凝集试验试剂盒相比,其结果符合率为98.6%。通过阻断试验、交叉试验,说明本方法在特异性上达到了较为满意的结果,且易于操作,适用于血清学定性诊断、检疫和大规模的血清流行病学调查。  相似文献
5.
气相色谱-质谱法测定猪肝中氯丙嗪残留的研究   总被引:7,自引:0,他引:7  
气相色谱—质谱法(GC-MS)检测猪肝中氯丙嗪的残留量,试样中残留的氯丙嗪经乙酸乙酯提取,用正己烷和C18柱净化后,用氨化乙酸乙酯洗脱。采用EI电离源方式进行选择离子扫描(SIM),选择离子包括86,233,272,318。方法的检测限为1μg/kg(S/N>3),线性范围为1-200μg/kg,加标回收率为68.00%-92.10%,相对标准偏差(n=5)为5.92-9.35%。该法具有灵敏度高,实用性强和操作简单等优点。  相似文献
6.
本研究采用国际八十年代中后期研究成功的特定DNA片段扩增技术—聚合酶链反应(PCR)技术,进行牛和绵羊胚胎性别鉴定。采用删除富集法,构建富含牛和绵羊Y—DNA文库,筛选出特异克隆,并根据其序列,分别设计合成引物,用PCR技术分别扩增牛Y染色体上约140bp的片段,绵羊Y染色体上约130bp的片段。对已知性别的牛和绵羊血液样品进行检测,准确率均为100%(10/10;11/11)。应用已建立的简易、快速胚胎取样方法及防污染措施,以及设计合成的引物和PCR检测胚胎性别的技术方法,奶牛胚胎经性别鉴定后移植,产犊牛7头(4头公犊,3头母犊),准确率为100%(7/7)。在内蒙牧区生产现场,对绵羊胚胎经性别鉴定后移植,共移植成功18只受体母羊(每只母羊移植2-4枚同性别胚胎),产羔25只(8只公羔,17只母羔),准确率为80%(20/25)。  相似文献
7.
竞争ELISA检测猪呼吸与繁殖综合征病毒抗体研究   总被引:5,自引:0,他引:5  
应用抗PRRSN蛋的单克隆抗体建立了竞争ELISA检测技术,与美国IDEXX公司的间接ELISA检测试剂盒对比检测了30份SPF猪血清,29头SPF猪人工接种呼吸与繁殖综合征病毒后于5d、12d、29d采集的猪血清共87份,临床血清95份,以及其他相关病毒的阳性血清。实验证明,竞争ELISA的检测阴阳性限值为30%,检测特异性为100%,在人工攻PRRSV病毒第五天的猪血清中,可检测到抗PRRSVN蛋白抗体,12dpi,阳性检出率为93%,29dpi,阳性检出率为100%,与IDEXXPRRSVELISA试剂盒进行比对,结果表明,二种检测方法检测美洲株PRRSV抗体的符合率为90%以上,但检测欧洲株抗体符合率较低。建立的竞争ELISA检测技术对于PRRSV美洲株抗体的早期诊断有非常重要的意义。  相似文献
8.
应用PCR检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒   总被引:4,自引:1,他引:3  
设计合成了1对引物,建立用于检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒的PCR方法。结果表明,PCR对羊接触传染性脓疱性皮炎病毒细胞培养毒的检测与细胞培养CPE、电镜检测的结果相一致。经对扩增产物进行序列分析,与已报道NZ—2株的核苷酸序列同源性高达97%。用此PCR方法扩增羊痘病毒、口蹄疫病毒、蓝舌病病毒,结果均为阴性。此方法用于检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒是可行的、特异的。  相似文献
9.
己烯雌酚完全抗原的合成和多克隆抗体的制备   总被引:3,自引:0,他引:3  
采用混合酸酐法,将己烯雌酚与牛血清白蛋白或卵清蛋白偶联形成完全抗原.经紫外分光光度计扫描鉴定,并通过聚丙烯酰胺电泳实验,推算出牛血清白蛋白与DES-HS的结合比是1:25~1:30.以己烯雌酚-牛血清白蛋白为抗原免疫家兔,制备出多克隆抗体,经酶联免疫吸附试验和琼脂扩散试验进行鉴定,并采用酶联免疫吸附方法进行效价测定,抗血清效价均超过了1:10 000.  相似文献
10.
用RT—PCR检测新城疫病毒的研究   总被引:3,自引:1,他引:2  
用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测新城疫病毒(NDV)。研究结果表明RT-PCR可检测出F48E9株、Lasota株、Ⅰ系疫苗株、L株、SY1株等5株NDV尿囊液为阳性,其敏感性可测至10-3倍稀释尿囊液病毒。RT-PCR还能直接检测出发病鸡气管中的NDV。  相似文献
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