黄灯笼辣椒子叶离体培养与植株再生

以黄灯笼辣椒无菌苗子叶为外植体,研究激素对不定芽分化及植株再生的影响。结果表明:6-BA对子叶不定芽的诱导效果最好;IAA与6-BA配合能明显提高子叶不定芽的分化率;在分化培养基中添加4mg/LGA3,有利于不定芽的伸长。不定芽分化的最适培养基为MS 6-BA5mg/L IAA1mg/L AgNO36mg/L,平均诱导率达75%;不定芽伸长的最适培养基为MS 6-BA3mg/L IAA1mg/L AgNO36mg/L GA34mg/L,平均伸长率可达90%;最佳生根培养基为MS IAA0.5mg/L,生根率达95%;建立了辣椒子叶植株再生体系。     

药用真菌植酸酶生产菌的筛选及基因片段的克隆

从15种药用真菌中筛选出8种产植酸酶的菌株，并对透明圈与菌落直径比较大的芸芝，茯苓、红托、赤芝进行酶活测定和基因片段的克隆。     

苎麻茎尖的组织培养及其诱导植株的再生

对苎麻50号品系的茎尖进行组织培养并诱导植株再生。结果表明:最适茎尖转绿和分化的培养基是1/2MS 6-BA1.0mg/L CH300mg/L的液体培养基,茎尖分化率为100%。最适成苗培养基为MS 6-BA0.5mg/L IAA0.1mg/L CH300mg/L,成苗率是53.3%。扩繁培养基为MS 6-BA0.3￣1.0mg/L,繁殖系数达6.7。适宜生根培养基为1/2MS NAA0.01mg/L。最佳茎尖剥取材料是无菌试管苗,茎尖长以0.3mm带1￣2个叶原基为宜。从茎尖接种培养成苗到移栽需4个月左右。     

大肠杆菌glgC基因的定点突变及高效表达

通过PCR方法,从E.coliJM109基因组DNA中扩增到全长为1296bp的glgC基因,对其进行定点突变,获得第296位和336位氨基酸同时突变的glgC336基因。将2者亚克隆进pET-30a,成功构建了重组表达载体pET-C和pET-C336,转化大肠杆菌BL21(DE3),在1mmol/LIPTG诱导下进行表达。SDS-PAGE电泳分析显示,在约53kD处有1条明显的蛋白表达带,证明目的基因已得到高效表达,且重组蛋白表达量占菌体蛋白总量的77.3%。     

木薯淀粉分支酶SBEⅠ反义基因遗传转化木薯的研究

旨在获得转淀粉分支酶反义SBEⅠ基因的‘华南木薯8号’转基因植株,为利用转基因技术改良木薯淀粉品质打下基础。在建立了木薯从胚状体子叶到完整植株的再生体系的基础上,用块根特异表达启动子Sporamin驱动的木薯淀粉分支酶SBEⅠ反义基因,通过农杆菌介导法对‘华南木薯8号’进行遗传转化。共接种‘华南木薯8号’子叶517块,获得7株生长良好的转化再生植株,转化再生频率达到1.35%。经PCR检测,其中5株转化再生植株扩增出目的条带,初步证实木薯淀粉分支酶SBEⅠ反义基因已整合进了‘华南木薯8号’基因组中。通过农杆菌介导法可以将淀粉分支酶SBEⅠ反义基因导入到‘华南木薯8号’基因组中,获得了5株转基因植株。     

块根特异启动的木薯SBE I、SBE Ⅱ基因 RNAi载体的构建及鉴定

利用基因重组技术,分别克隆木薯SBEⅠ基因ORF中的494 bp的片段和SBEⅡ基因ORF中的340 bp的片段;并通过重叠延伸PCR方法,扩增融合SBEⅠ、SBEⅡ基因片段的大片段SⅢ,将其正向、反向插入植物RNAi表达载体pART27中,同时克隆块根特异性启动子取代原来载体上自有的35S启动子,构建块根特异启动的可编码发夹结构的RNAi表达载体Sp-pRNAiSⅢ,为后续培育高直链淀粉含量的木薯新品种等实验打下基础。     

AGPase基因转化木薯获得转基因植株的研究

通过农杆菌介导法将一个提高淀粉含量的AGPase基因在块根特异启动子的调控下成功导入木薯华南8号(SC8)基因组,并获得转化抗性再生植株25株,转化率为1.20%。经生根初筛有19株转化植株能在抗性生根培养基生根,经PCR、Southern等分子检测证实这19株转化植株为转基因植株。     

The Microbiologic Water Pollution on Marine Ecosystems Velipoja Beach,Albania

Waters in marine ecosystems are likely contamination. The origin of pollution may be industrial, radioactive, agricultural, urban mikobiologjike etc.. The study was conducted in the waters of the Adriatic sea ecosystem aims to analyze the microbiological contamination areas. These waters are used for holiday purposes by citizens. The samplings of marine water are taken from the stratum water surface about 10 cm, at a distance 10-20 m by sea coast. These samples are examined in laboratory for determination of two micro organisms, indicators excrements pollution Faecal Coliform （FC） （ISO 9803） and FC, probably Streptococcus Faecal （FS） with Filtrate Membrane Method＇s in specific areas （ISO 7899-2）. In area Velipoja, Albania, the microbiologic elaborated analyses have resulted as follows： For FC and Streptococcus Faecal are given the minimal values FC-50, FS-50 and maximal values FC-90, FS-90 per 100 mL. About the evaluation of reaction （pH） is concluded that in Albania the sea waters coastal zones have a lightly alkaline ambient, where pH value is in the range 7.5-8.3, estimated according to recommended standards 6-9. No cases of red-tide algae development have been observed.     

木薯淀粉分支酶基因克隆及反义表达载体的构建

利用RT-PCR方法,用木薯块根cDNA做模板克隆获得支链淀粉合成的关键酶基因SBEII,经序列分析,同源性为98.07%;以PCAMBIA1301为基础,构建了以块根特异表达启动子Sporamin驱动的SBEII基因反义结构的植物表达载体.     

海南普通野生稻的花粉育性观察及杂交亲和性

对海南3个不同居群的普通野生稻(O.rufipogon Griff.)的花粉育性进行了观察研究,并采用荧光显微镜技术观察了转基因水稻花粉在不同居群的普通野生稻柱头上的萌发和在花柱内的生长过程。结果表明,以转基因水稻为对照,3个不同居群的野生稻相互之间花粉可育率在1%水平上差异极显著。用荧光显微镜观察时发现,转基因水稻花粉能在3个居群的普通野生稻的柱头上萌发并能到达胚珠,二者杂交亲和,同时发现,花粉管进入三亚居群胚珠的数目比儋州、万宁居群的数目多,说明相对于儋州、万宁居群来说,三亚居群与转基因水稻的杂交亲和性更高。