抑制性消减杂交技术在养殖鱼类免疫基因克隆中的应用

抑制性消减杂交技术(SSH)是近年来兴起的一种分离、克隆差异基因的新技术,它结合了消减杂交和抑制PCR的优点,具有操作简便、特异性强、背景低及重复性好的优点。目前已经用SSH技术鉴定出了鱼的许多免疫相关基因,如白细胞介素、趋化因子、肿瘤坏死因子、溶菌酶、NKEF、补体、干扰素及急性期蛋白基因等,对它们的结构和功能进行了较为深入的研究。本文对SSH技术在养殖鱼类中克隆的免疫基因进行了归纳与总结,旨为全面了解鱼类的抗病免疫基因提供基础资料。     

固定化培养底栖硅藻研究

海产底栖硅藻是匍匐型贝类鲍、蝾螺和埋栖型贝类缢蛏、泥蚶以及底栖动物海参、海胆等名贵水产动物苗种的重要饵料。在鲍鱼育苗中,体长5mm以下的稚鲍以及海参育苗中,体长2mm以下的稚参都以底栖硅藻为主要饵料。底栖硅藻培养的成败与否,直接影响到这些水产动物的苗种生产的成败。在底栖硅藻的大量培养中,光照、温度、盐度、酸碱度等环境因素和N、P、Fe、Si等营养元素及许多植物激素都能影响底栖硅藻的生长。而且底栖硅藻营底栖生活,不像浮游微藻那样能立体地利用水体,不像浮游微藻那样在悬浮状态可以高效率利用营养物质,他们的生长受到了营…     

出口水产品中微生物污染调查分析及限量探讨

为了解出口水产品中微生物污染状况,并为制定微生物限量标准提供依据。采用GB/T 4789—2010的微生物检测方法,检测待出口水产品中菌落总数、大肠菌群、大肠杆菌、沙门氏菌及金黄色葡萄球菌,并与国内外微生物限量标准进行比较。结果显示,374份检测样品中均未检出大肠杆菌及沙门氏菌;金黄色葡萄球菌的总检出率为1.87%;菌落总数基本符合标准,达标比例分别为:鱼制品93.3%,冷冻鱼类96.36%,虾类100%,软体动物85%,饭食类88.89%;大肠菌群为主要污染菌,上述种类符合标准的比例分别为:58.53%,77.38%,72.73%,45%,100%。     

坎氏弧菌热不稳定溶血素基因的克隆表达、蛋白纯化及其活性

坎氏弧菌(Vibrio campbellii)是水产养殖动物的重要致病茵.本研究构建了坎氏弧菌热不稳定溶血素(TLH)基因的重组表达质粒pET2610(+)/tlh,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达带有6个组氨酸的TLH融合蛋白,然后利用Ni琼脂糖亲和层析柱进行纯化.SDS-PAGE分析显示,该溶血素能够大量表达,分子量约为42 kD.纯化的TLH(0.41mg/mL)具有较强的溶血活性(溶血圈直径为16 mm)及磷脂酶活性(晕圈直径为15 mm).其溶血活力的最适温度为37℃,在75℃下培养30 min即丧失活力;最适pH为6,pH大于或小于6时都会导致其稳定性下降;一价金属离子如Na+、K+对溶血活性几乎没有影响,而部分二价金属离子如Ca2+、Co2+会导致溶血活性降低.本研究结果对阐明坎氏弧菌的致病机理及基因工程疫苗开发有重要意义.