鱼类胸腺研究进展

胸腺是大多数鱼类最早发育的中枢淋巴器官[1],也是产生功能性Ｔ淋巴细胞的主要免疫器官[2]。在鱼类免疫细胞的发生过程中,胸腺是最先检测到Ｔ细胞的淋巴组织,Ｔ淋巴细胞在胸腺中发育成熟并被运送到头肾、脾等外周免疫器官[1,3]。另外,许多研究表明鱼类的胸腺直接参与机体防御。例如,胸腺存在Ｂ细胞、浆细胞和空斑形成细胞,表明胸腺直接参与了抗体的产生[4],即胸腺参与了体液免疫反应。在虹鳟(Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓｍｙｋｉｓｓ)的迟缓型超敏性反应中,大胸腺细胞数量急剧增多[5],表明胸腺本身参与了细胞免疫[6]。胸腺切除实验表明,胸腺在…     

柱状黄杆菌胶原蛋白酶的克隆与表达

利用PCR方法从柱状黄杆菌(Flavobacterium.columnare)G4株中克隆了1个胶原蛋白酶基因(GenBank登录号EF501979).同源性比对发现该基因与柱状黄杆菌的另外1种胶原酶基因(GenBank登录号EAZ95511.1)最为相近,有84%的一致性和93%的相似性.该属的另外2种细菌,约氏黄杆菌(Flavobacterium.johnsoniae)和嗜冷黄杆菌(F.psychrophilum)都有与该胶原酶基因相似的基因,其相似性分别为92%和83%.该基因经KpnI和SalI酶切后连接到表达载体pET-32a上,转人大肠杆菌BL21(DE3)plysS内进行表达,经SDS-PAGE电泳后显示重组融合蛋白在44 kD处有明显表达带,与预期分子量大小一致,且主要以不溶的包涵体形式存在,变性条件下利用His·Bind树脂成功纯化了融合蛋白,将其免疫家兔,获得兔抗柱状黄杆菌胶原蛋白酶抗体,Western blotting表明该胶原酶在柱状黄杆菌的胞内和胞外都存在.这些结果为进一步研究这种胶原蛋白酶的功能及柱状黄杆菌的致病机理奠定了基础.     

嗜水气单胞菌asd-1基因功能研究

asd-1基因编码天冬氨酸半醛脱氢酶,该酶可影响革兰氏阴性菌的细胞壁正常合成。为了研究嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)asd-1基因的功能,采用Overlap PCR方法敲除该基因,结果显示asd-1基因的敲除明显降低了嗜水气单胞菌的生长速度,但是不会导致突变株对二氨基庚二酸(DAP)的强制需求,进一步对氨基酸序列分析表明asd-1蛋白质较迟缓爱德华氏菌、鲶爱德华氏菌的asd A蛋白质多出3个氨基酸,其中Asn-257导致asd A蛋白质中的关键活性位点Arg-267在asd-1蛋白质中改变为Val-267,该研究表明嗜水气单胞菌的asd-1基因突变显著降低其生长速度。