曼氏无针乌贼维甲酸X受体(RXR)cDNA的克隆与表达

维甲酸 X 受体(retinoid X receptor, RXR)属于配体激活的核受体家族。本研究采用 RT-qPCR 技术克隆了曼氏无针乌贼 RXR (SjRXR)基因的 CDS 区核酸序列, 推导出其氨基酸序列, 并对 RXR 基因 CDS 区核苷酸序列与蛋白质结构进行了生物信息学分析, 结果如下: SjRXR 的 CDS 区核苷酸序列全长 1239 bp, 编码 1 个由 412 个氨基酸组成的蛋白质; 序列分析表明, 曼氏无针乌贼 RXR 的 CDS 区基因编码的蛋白质不含有信号肽, 无跨膜结构, 推测 RXR 编码蛋白属于非分泌型、非跨膜蛋白; 对蛋白进行疏水性分析, 发现亲水性部分大于疏水性部分, 预测 RXR 编码蛋白为亲水性蛋白, 包含 1 个 HOLl 家族的结构域; 利用 MEGA 6.0 软件以 ML 法构建了系统进化树, 结果表明, 曼氏无针乌贼与双斑蛸亲缘关系最近, 同属于软体动物门头足纲, 最先聚为一支, 曼氏无针乌贼 RXR 基因的分子进化地位与其生物学分类地位大体保持一致。采用 RT-qPCR 技术分析了该基因在乌贼 4 个时期 11 个组织中的表达规律, 结果如下: sjRXR 基因在各组织中均有表达, 且在肝、胰、脑、视叶和视腺中表达量较高; sjRXR 基因表达在不同生长周期存在明显变化, 在肝、胰中呈一直上升趋势, 在脑、视叶、视腺中呈先上升后下降趋势。SjRXR 是曼氏无针乌贼神经发育、生殖调节和衰老凋亡的重要调控因子之一, 本研究结果可为进一步深入研究头足类动物 RXR 基因提供重要参考依据。     

枯草芽孢杆菌粗酶液对Cry1Ac蛋白质的降解特性

为了明确枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)粗酶液对Cry1Ac毒蛋白质的降解特征,采用蛋白质凝胶电泳[十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)]和酶联免疫吸附法(ELISA),在不同温度和pH值条件下测定该菌粗酶液降解Cry1Ac蛋白质的特性。结果表明,枯草芽孢杆菌主要以胞外酶液降解Cry1Ac蛋白质,胞外粗酶液在40℃、pH值为10的条件下对Cry1Ac蛋白质的降解效果最佳,粗酶液S_1对Cry1Ac蛋白质降解的米氏常数(K_m)为2.099 4μg/L,最大反应速度(V_(max))为0.239 58μg/(L·min)。在降解45 min时,Cry1Ac蛋白质含量由4.987μg/L降至0.159μg/L,其降解程度达极显著水平(P0.01),其降解率为96.815%。枯草芽孢杆菌的胞外酶液主要发挥降解Cry1Ac蛋白质的作用,其粗酶液对Cry1Ac蛋白质的降解最适条件为40℃、pH值为10以及K_m为2.099 4μg/L。     

紫贻贝产卵前后转录组分析与相关基因的筛选

为探究紫贻贝(Mytilus galloprovincialis)雌性生殖相关基因在产卵过程中发挥的功能及其参与产卵活动的调控机制,对紫贻贝产卵前后的性腺组织进行了转录组测序分析。结果显示,紫贻贝产卵前后存在的差异表达基因为4060个,其中上调的基因数目为1488个,下调的基因数目为2572个。GO富集分析显示,这些差异基因主要参与生长、发育过程、生殖、生殖过程等生殖相关的生物学途径。KEGG富集分析显示,与产卵、生殖相关的信号通路包括TCA循环、GnRH信号通路、卵巢类固醇生成、雌激素信号通路、催产素信号通路、类固醇生物合成等能够被显著富集。荧光定量分析结果显示,促黄体生成激素β (LHβ)和基质金属蛋白酶14 (MMP14)基因表达水平显著升高,促性腺激素释放激素受体(GnRHR)、细胞色素P4503A酶(CYP3A)、细胞色素P45017A酶(CYP17A)基因表达水平显著下降。本研究利用转录组学分析了紫贻贝在产卵前后性腺组织转录水平的差异,揭示了紫贻贝性腺组织中参与调节产卵过程的主要途径和候选基因,为进一步阐明紫贻贝产卵活动的内在调控机制提供数据支撑,也为紫贻贝苗种繁育提供理论...     

苯并[a]芘(BaP)急性暴露对泥蚶消化腺的毒性效应及其应对机制初探

本文研究了苯并[a]芘(benzo[a]pyrene, BaP)急性暴露对泥蚶(Tegillarca granosa)的毒性效应，并以泥蚶的消化腺为目标组织，对泥蚶抵抗BaP毒性的机制进行了初步探究。对样本进行HE染色并对所采集的图像进行分析处理，结果发现，暴露于BaP导致泥蚶消化腺组织出现坏死。对样本进行脂质过氧化并进行DNA氧化损伤测定的结果显示，暴露于BaP导致泥蚶消化腺氧化压力增加，进而导致脂质过氧化以及DNA氧化损伤等细胞层面的损伤。抗氧化酶活性测定结果显示，BaP胁迫诱导泥蚶产生氧化应激反应，抗氧化防御体系积极参与BaP诱导的氧化应激调控过程。神经毒性指标测定结果显示，BaP胁迫可能影响泥蚶神经冲动的传导而具有神经毒性。此外，DNA甲基化水平测定及抗氧化酶基因表达测定的结果显示，泥蚶可能通过降低DNA甲基化水平来激活抗氧化系统以对抗BaP毒性。综上所述，急性BaP暴露会对泥蚶产生显著的毒性效应，以组织损伤、氧化应激反应和神经毒性为主要表征；泥蚶可能通过调整自身DNA甲基化水平来对抗BaP毒性效应。通过本研究，有望为深入探索双壳贝类应对石油污染物胁迫的内在调控机制提供新思路，同时为石油污染威胁下泥蚶的生物资源保护提供参考。