青虾病原菌对常用抗菌药物的敏感性测定与分析

正为有效防治青虾病害,我们于2017—2019年对江苏省青虾主要养殖区进行流行病学调查,结果表明,引起青虾死亡的主要病原菌为嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌和非01霍乱弧菌。为有效防治嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌和非01霍乱弧菌对青虾等水产养殖动物的危害,本试验采用纸片扩散法(K-B法)     

青虾源维氏气单胞菌双重PCR检测方法的建立

根据NCBI已发表的维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)促旋酶B亚单位基因gyrB和编码细菌RNA聚合酶σ70因子基因rpoD的保守序列设计引物,建立了一种快速检测青虾源维氏气单胞菌的双重PCR检测方法。结果显示:青虾源维氏气单胞菌gyrB和rpoD基因PCR扩增产物大小分别为815 bp、554 bp,而对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、哈维弧菌(Vibrio harveyi)、副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)、需钠弧菌(Vibrio natriegens)、非O1霍乱弧菌(non-O1 Vibrio cholerae)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)扩增结果皆为阴性;灵敏性试验结果显示该方法检测到的最低菌体DNA量为1.8×10-2 ng/μL,且10份送检样本检测结果与传统细菌分离鉴定结果相一致。结果表明,双重PCR检测方法特异性好、灵敏性高,适用于青虾源维氏气单胞菌的快速检测。     

罗氏沼虾源产气肠杆菌分离鉴定及耐药性分析

2017至2018年春季罗氏沼虾育苗期间,江苏省高邮市多家育苗场幼体和仔虾持续发生死亡。从发病幼体和仔虾分离到大量优势生长的细菌,人工感染试验证明其对罗氏沼虾幼体和仔虾有较强的致病性。对分离菌进行了形态特征、理化特性、胞外酶及溶血素活性等表型生物学性状检验,测定了代表菌株的16S rRNA和gyrB基因序列,分析了16S rRNA和gyr B基因序列的同源性。结果显示:引起罗氏沼虾幼体大量死亡的病原之一为产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes),代表菌株XL2-1对罗氏沼虾仔虾和蚤状幼体的半数致死量(LD50)分别为2. 0×106和7. 0×105CFU/m L,胞外酶活性及溶血活性检测表明分离菌不溶血,不产生蛋白酶、卵磷脂酶、淀粉酶、尿酶及DNA酶;分离菌的耐药谱测定结果发现,分离菌对头孢噻肟等7种药物敏感,对青霉素G等9种药物耐药,对头孢曲松等19种药物存在株间差异。     

罗氏沼虾病原阴沟肠杆菌药物敏感性测定与分析

采用纸片扩散法(K-B法)测试了2017年春季分离自江苏省高邮市罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)育苗场的5株阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)对35种抗菌类药物的敏感性,并采用试管稀释法测定了6种抗菌药物对分离菌株WJ1的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),结果显示:恩诺沙星对阴沟肠杆菌的杀菌效果最好,最小杀菌浓度为4 mg/L;其次是诺氟沙星,最小杀菌浓度为7 mg/L;盐酸土霉素和氟苯尼考的最小杀菌浓度分别为8 mg/L和10 mg/L;红霉素和头孢曲松对阴沟肠杆菌杀菌效果最差。