荧光原位杂交技术的发展及其在植物基因组研究中的应用

荧光原位杂交(FISH)技术能够实现DNA序列在染色体上的物理定位,已经广泛应用于植物基因组研究中。本综述基于FISH技术分辨率和灵敏度的提高,从探针类型和靶标染色体类型两个方面总结了FISH技术的发展进程及不同FISH技术的应用优势和不足之处。在技术应用方面,总结了FISH技术在植物染色体识别、核型分析、系统进化及亲缘关系分析、异源染色质及转基因鉴定、基因定位和物理图谱构建等研究中的应用进展,并对其应用前景进行了展望,以期为植物基因组研究提供更多的研究思路。     

一种高效提取棉花细胞核的技术

[目的]研究一种高效提取棉花细胞核的技术,为棉花大片段基因组文库的构建和全基因组测序提供技术。支持。[方法]采用“刀切法”,在含有Triton X-100和PVP40的冰冷细胞核提取缓冲液中,用锋利刀片切割发育1周的棉花黄化子叶以释放细胞核,并经过100、50、和30μm的膜过滤后离心收集细胞核,同时选取棉花幼嫩叶片和黄化处理时间不同的子叶分别用研磨法和刀切法作对照。[结果]刀切法所得细胞核干净完整杂质少,不需要研磨和巯基乙醇等处理,方便快捷无毒害,成功率达100％。[结论]建立了一种简单、高效快捷、无毒害的棉花细胞核提取技术。     

适用于棉花荧光原位杂交的DNA纤维高效制备技术

棉花富含酚类和多糖等高分子次生化合物,细胞质浓厚,且染色体形态小、数目多、制片困难,至今还未见棉花DNA纤维制备方面的报道。本研究用“刀切引流法”,在含有Triton X-100和PVP40的冰冷细胞核提取缓冲液中,用锋利的刀片切割发育一周的棉花黄化子叶以释放棉花细胞核,所得细胞核干净完整杂质少,不需要研磨和巯基乙醇等处理,方便快捷无毒害,成功率达到100%。细胞核在室温下经温和碱裂解去除染色质上的蛋白质后,以前端导引裂解液铺展载玻片,即“引流法”拉伸制备DNA纤维,避免了液体表面张力的影响,消除了因载玻片推抹用力不均而导致的DNA纤维堆积和断裂,所制备的DNA纤维平直完整、伸展程度均匀、背景清晰。用基因组和45S rDNA 分别标记探针进行杂交,结果表明所制备的棉花DNA纤维适用于荧光原位杂交。本研究探索出一套简单、高效、快捷、无毒害的适宜于棉花荧光原位杂交的DNA纤维制备技术,必将为棉花基因组研究和全基因组序列的最终完成提供强有力的技术支持。     

水库网箱养殖丁鱥试验

我们于2004年3月12日至11月16日在安阳市彰武水库进行了丁鱥网箱养殖试验，取得较好的成绩。现将试验情况总结如下。     

俄罗斯鲟肌肉营养成份的分析

采用生化分析方法对工厂化养殖的1龄和2龄俄罗斯鲟的肌肉营养成份进行检测。结果表明,1龄鱼的水分含量为80.84%,蛋白质含量为16.10%,脂肪含量为2.14%,灰分含量为0.92%;2龄鱼的水分含量为79.96%,蛋白质含量为15.00%,脂肪含量为4.08%,灰分含量为1.26%;1龄俄罗斯鲟肌肉中蛋白质含量高于2龄,脂肪含量低于2龄,且差异均显著;1龄和2龄俄罗斯鲟肌肉蛋白质中都含有18种氨基酸,平均含量分别为15.60%、14.46%,其中8种人体必需氨基酸平均含量分别为6.30%、5.95%,4种呈味氨基酸的平均含量分别为6.70%、6.26%;1龄和2龄俄罗斯鲟肌肉中都包含有9类脂肪酸,脂肪酸总量及各类脂肪酸含量都非常接近。     

水库网箱养殖丁试验

我们于2004年3月12日至11月16日在安阳市彰武水库进行了丁网箱养殖试验,取得较好的成绩。现将试验情况总结如下:一、材料和方法1.库区条件彰武水库是丘陵型中等水库,水质清新,溶氧丰富,pH7.2～7.6,平均透明度夏季76厘米,冬春季150～200厘米。2.网箱结构与设置网箱采用双层5×3股结节聚乙烯网片缝制,网目3.0厘米,网箱规格5米×5米×3米,网箱设置在水深8米以上,阳光充足、无污染、无干扰的北岸库湾。网箱四边用毛竹作框架,用泡沫塑料和油桶作浮子,砖块作沉子,使网箱在水中能完全伸展开。鱼种放养前2周将网箱下水,使其软化并产生一些附着物,…     

水库网箱养殖翘嘴红鲌试验

在水库中进行翘嘴红鲌养殖试验,取得105千克/m2、利润545元/m2、投入产出比1∶2.46的成绩。对网箱设置、鱼种放养、养殖管理等影响因素进行了讨论。     

同一SSR引物在不同棉种BAC文库中的筛选及其FISH分析

本实验室前期利用SSR引物NAU1201筛选海岛棉Pima 90-53 BAC文库，其中BAC克隆299N22含有特殊的重复序列。本试验用SSR引物NAU1201分别在阿非利加棉文库和达尔文氏棉文库中筛选到3个和1个阳性BAC克隆。这些BAC克隆在A（亚）组所有的染色体上均有弥散的杂交信号，而在D（亚）组所有的染色体上几乎没有杂交信号，这与海岛棉文库BAC克隆299N22的FISH结果一致。相似的FISH杂交信号说明这些BAC克隆极有可能均含有相同的重复序列。这些BAC克隆的获得为研究该重复序列在不同棉种基因组中的分布情况以及序列差异提供了物质基础。     

北方铜鱼套养试验

北方铜鱼属鲤形目，鲤科，铜鱼属。地方名：鸽子鱼。北方铜鱼是黄河流域上游的重要经济鱼类之一，喜栖息于水底砂石，肉食性，多食小型底栖动物。其生长速度快，肉质细嫩鲜美，含肉率高，具有很高的经济价值和较好的养殖前景，是中国内陆水域中有待开发利用的重要种质资源。     

翘嘴红鱼白苗种培育技术研究

在池塘中采用常规苗种培育技术培育翘嘴红鮊鱼种,在2.1亩池塘经过6个月的培育,收获翘嘴红鲌鱼种1249千克,单产595千克/亩,平均规格57克/尾,成活率73%,投入产出比127.