海参组织蛋白酶K的部分酶学性质及其对海参自溶的影响

采用特异性荧光底物法检测海参体壁组织蛋白酶K(CTSK)的酶学性质并初步探讨其对海参自溶的影响。结果表明:CTSK的最适pH为5.0,最适温度为50℃,在20~40℃之间酶活力稳定性较好;Zn~(2+)、Fe~(2+)、Fe~(3+)、Cu~(2+)均对CTSK产生一定抑制作用,抑制率均超过60%;而Ca~(2+)和Mn~(2+)对其活性影响不大,Mg2+可增强该酶活性、CA-074、Z-Leu-Leu-Leu-H(ZLLL)、碘乙酸、E-64、抗痛素、PMSF对CTSK的抑制率均在85%以上,EDTA和1,10-菲啰啉对该酶的抑制率分别为39.7%和16%,而DTT和L-Cys可将该酶活力分别提高至127.46%和238.3%。在海参匀浆物中分别加入特异性抑制剂CA-074和ZLLL,25℃水浴加热使其发生自溶,并通过SDSPAGE检测CTSK对海参蛋白降解的影响。结果显示ZLLL能够在一定程度上抑制海参蛋白的降解。CTSK是一种巯基氨基酸含量较高的半胱氨酸蛋白酶,具有一定的金属离子依赖性,但又易被多种金属离子抑制;CTSK有可能直接参与海参自溶过程中蛋白质的降解。     

中华绒螯蟹细胞色素CYP2基因的克隆与表达分析

为研究细胞色素CYP2基因在中华绒螯蟹蜕皮及生长发育中的作用,本试验通过逆转录聚合酶链式RT-PCR反应以及cDNA末端快速扩增RACE技术获得了中华绒螯蟹CYP2基因cDNA全长。用实时荧光定量PCR技术,分析该基因在中华绒螯蟹蜕皮过程中各组织的相对表达量。试验结果显示,中华绒螯蟹CYP2的cDNA全长1772bp,编码491个氨基酸序列,包括一个84bp的5′端非编码区,一个212bp的3′端非编码区、一个1475bp的开放阅读框,经BLAST比对,该核苷酸序列与岸蟹、三疣梭子蟹的相似性分别为66%、64%。实时荧光定量PCR结果显示,中华绒螯蟹蜕皮前,CYP2基因在鳃中的表达量相对最高;在肝胰脏、肌肉中表达量略低于鳃;在Y器官、眼柄、胸神经节、脑神经节、肠中少量表达;在心和胃中表达量最低。中华绒螯蟹在不同的蜕皮时期中,通过荧光定量试验得出,肝胰脏中CYP2基因表达量在蜕皮前期和蜕皮期最高;眼柄中CYP2基因表达量从蜕皮期到蜕皮后期有上升趋势;鳃中CYP2基因表达量在蜕皮前期最高;Y器官、脑神经节和肠中CYP2基因表达量在蜕皮期最高;肌肉中CYP2基因表达量在蜕皮前期最高;胸神经节和胃中CYP2基因表达量在蜕皮后期最高;Y器官中CYP2基因在蜕皮前期表达量高于蜕皮后期和蜕皮期。以上试验结果表明,CYP2对中华绒螯蟹蜕皮生长中的调控可能起到重要作用。     

牛蒡叶中绿原酸超声波法提取工艺研究

[目的]提高牛蒡叶中绿原酸的提取率,节约提取时间,优化超声波提取条件,降低绿原酸的生产成本。[方法]采用超声波粉碎干制牛蒡叶,用乙醇对牛蒡叶中绿原酸进行提取。在单因素试验优化超声波法提取牛蒡叶中绿原酸工艺条件的基础上,利用正交试验设计确定最佳提取工艺。[结果]L9（34）正交试验结果表明,各因素对牛蒡叶中绿原酸得率的影响大小顺序为：乙醇水比〉超声时间〉超声频率〉超声功率;绿原酸提取的最佳工艺条件为：乙醇水比2.5∶1、超声时间25min、超声频率8s、超声功率900W,绿原酸的提取率最高为2.922%。[结论]超声波法提取牛蒡叶中绿原酸,可以缩短提取时间,提高提取效率,可为实际生产提供借鉴。