狂犬病病毒HEP-Flury M基因重排后在小鼠神经母细胞瘤细胞中的表型分析

【目的】探究狂犬病病毒HEP-Flury M基因重排对基因转录和蛋白表达的影响,揭示病毒在小鼠神经母细胞瘤(NA)细胞中的表型变化与M基因重排的相关性。【方法】通过荧光定量PCR、Western blot以及病毒在NA细胞中的生长和扩散试验,对亲本毒株rHEP-Flury和M基因重排毒株M2、M4在NA细胞中的基因转录、表达、生长和扩散进行比较。【结果】狂犬病病毒结构基因的转录和表达主要受病毒基因组RNA合成的影响,但是在一个完整转录过程中单个结构基因的转录比例与其所在位置相关,M基因重排病毒的Leader RNA (LeRNA)和L mRNA的转录比例显著高于亲本毒株rHEP-Flury。M基因重排病毒在NA细胞中的生长和扩散都劣于亲本毒株rHEPFlury。【结论】狂犬病病毒亲本毒株rHEP-Flury具有狂犬病病毒原始的基因组顺序,在NA细胞中的生长和扩散都明显优于M基因重排病毒。结构基因在基因组中的位置主要决定其在一次转录过程中的转录比例,进而影响病毒在NA细胞中的生长和扩散。     

鸭坦布苏病毒病研究进展

自2010年我国首次暴发鸭坦布苏病毒病以来,目前已给我国养鸭业造成了很大的损失,已成为我国主要鸭病之一。本文从该病毒的流行病学及实验室诊断方法两个方面对鸭坦布苏病毒病进行综述。     

荧光素酶标记狂犬病病毒的反向遗传学

通过分子生物学技术克隆萤火虫荧光素酶(Luciferase)基因完整开放阅框后将其定向亚克隆入狂犬病病毒HEP-Flury株全长基因组中的假基因区域,经PCR、双酶切及测序证实构建了嵌有荧光素酶基因的狂犬病病毒全长cDNA感染性克隆。之后,利用反向遗传操作技术进行病毒拯救,抗核蛋白单抗直接免疫荧光染色结果显示,成功拯救了携荧光素酶基因的重组狂犬病病毒rHEP-luc株,RT-PCR证实插入的荧光素酶基因能够稳定遗传;荧光素酶活性分析显示,荧光素酶基因成功表达并具有良好生物学功能;这为应用活体成像技术研究荧光素酶标记狂犬病病毒在小鼠体内侵染移行规律奠定了基础。     

狂犬病病毒反向遗传学研究进展

反向遗传学(Reverse genetics)是由基因结构认识基因功能的科学,与之相关的研究技术称为反向遗传学技术(Reverse genetic manipulation).RNA病毒的反向遗传学是采用病毒的遗传物质,在培养细胞或易感宿主中重新拯救出活病毒或类似病毒物质.能够拯救病毒的遗传物质称为感染性克隆,一般是在细菌质粒中含有整个病毒基因组的cDNA拷贝,使得cDNA本身或从cDNA体外转录所得的RNA具有感染性.自1978年第1例RNA病毒Qβ噬菌体的成功拯救以来,各类RNA病毒的分子生物学研究取得了长足的进展,这主要归功于各种RNA病毒反向遗传系统的建立和发展.     

狂犬病毒糖蛋白单、双拷贝基因重组腺病毒的构建

将携带狂犬病毒糖蛋白单、双拷贝基因的穿梭栽体pShuttle-G和pShuttle-dG分别经PmeⅠ线性化后电转化含E1和E3区缺失的人5型腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态菌株BJ5183-AD-1进行细菌内同源重组,经抗性筛选,PcR、PacⅠ酶切及测序鉴定.构建了狂犬病毒糖蛋白单、双拷贝基因重组腺病毒质粒pAdHu5-G和pAdHu5-dG,线性化后分别转染Ad-293细胞进行病毒包装.结果显示,在第4天发生细胞病变效应,且荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白的表达;western-blot证实2株重组腺病毒表达的糖蛋白能被特异性单抗识别;遗传稳定性分析显示,病毒传至10代时单G和双G基因均稳定遗传,没有发生缺失和突变.为比较分析2株重组腺病毒糖蛋白的表达时效及免疫效果奠定了基础.     

猪瘟乳前免疫问题的研究及其相关试验

在仔猪初生阶段免疫功能尚不健全时接种猪瘟疫苗的猪瘟乳前免疫方法,我国已广泛应用了几十年。然而,这种方法一直广受国外养猪专家的质疑,国内近年来也开始出现对这一问题的不同声音。为研究这一问题,笔者与相关人员设计并完成了一项猪瘟乳前免疫相关试验。结果表明,乳前免疫可能存在使仔猪产生免疫耐受性的风险;仔猪母源抗体值与母猪抗体值显著相关;仔猪通过吸食初乳,能获得几乎与母猪相同的对猪瘟的免疫力,而且可以维持足够长时间;仔猪的猪瘟免疫问题,完全可以通过加强母猪的猪瘟免疫来解决,乳前免疫纯属不必要;如果猪场担心猪瘟问题,适当提前仔猪猪瘟初免时间,似未尝不可。     

PRRSV对链球菌病的引爆作用及其对养猪业的危害

<正>近年来,全国各地蔓延不断的"高热病"疫情,给我国养猪业带来沉重的打击。在"高热病"防控过程中,由于很多猪场都仅仅把注意力专注于高致病性蓝耳病,而忽略了一些相关的细菌性疾病,防控效果常差强人意,有时甚至越治越严重。     

ELISA与FAVN方法检测犬狂犬病抗体的比较

比较酶联免疫吸附试验(ELISA)与细胞培养病毒中和试验(FAVN)检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体.将40只犬免疫兽用狂犬病疫苗后,第14 d静脉采血分离血清,分别采用ELISA法和国际贸易指定试验FAVN法检测血清样品,试验犬免疫第21 d攻击狂犬病毒BD06株.结果表明,两种方法检测结果差异不显著(p≥0.05,p=0.19),FAVN、ELISA法检测狂犬病抗体与攻毒试验结果的阳性符合率均为100%.     

猪β-干扰素的研究进展

干扰素是由干扰素诱生剂诱导生物细胞所产生的一类高活性多功能的糖蛋白,干扰素自被发现以来,由于其广谱抗病毒、抗肿瘤活性及其强大的免疫调节作用而受到研究者们的重视。在其基因结构、作用机理及体外重组表达等方面都取得了巨大突破。作者综述了猪β-干扰素的基本特性、作用机理及其临床应用。     

鸡轮状病毒感染

在包括人在内的许多哺乳动物中,轮状病毒是引起腹泻和肠炎的主要原因之一。然而,直到最近人们才认识到轮状病毒也能引起禽类的感染。与哺乳动物一样,禽感染轮状病毒后经常出现剧烈的腹泻。轮状病毒引起的肠炎对养禽业的经济损失尚未作出评估,但从这种病毒引起哺乳动物的肠炎来推断,轮状病毒对养禽业的经济损失是很大的。某些哺乳动物的轮状病毒很难超越种属间的屏障,现仍不清楚禽类的轮状病毒能否感染人和人的轮状病毒能否感染禽类。