湖羊BMPRIA和BMPRII基因组织表达谱及其在卵巢组织中mRNA表达水平与排罗丹数间的相关性研究

为了探索湖羊多胎分子机理,筛选影响湖羊多胎性状的特有候选基因,本试验选取16只经产湖羊母羊,分为单羔组和多羔组,同期发情后屠宰观察卵巢排卵数,并利用RT-PCR和荧光定量PCR技术对湖羊BMPRIA和BMPRII基因的组织表达特征以及在单羔组和多羔组卵巢组织中的表达水平进行分析.结果表明:BMPRIA和BMPRII基因除了在湖羊卵巢组织中有表达外,在下丘脑、垂体、子宫、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、输卵管等组织内也均有表达;单羔组和多羔组间卵巢组织BMPRIA基因mRNA表达水平差异不显著(P>0.05),且与排卵数间没有显著相关性(P>0.05);但是,多羔组卵巢组织BMPRII基因mRNA表达水平显著高于单羔组(P<0.05),且与排卵数呈显著正相关(r=0.722,P<0.05).结果说明BMPRII基因可能对湖羊排卵数起作用,是影响湖羊排卵数的候选基因.     

TGF-β受体mRNA在湖羊机体组织中的表达水平及其与排卵数的关系

 【目的】通过分析TGF-β受体(TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ)mRNA组织表达谱及其表达水平与湖羊排卵数的关系,研究TGF-β受体对湖羊排卵数的影响。【方法】挑选16头经产母羊,其中8只产多羔的为高产组,8只产单羔作为对照组,使用氯前列醇钠法进行同期发情,发情后48～60 h内屠宰,测定排卵数;分离取高产组母羊的下丘脑、垂体等组织样进行组织表达谱分析,用实时荧光定量PCR法检测湖羊卵巢TGF-βRⅠ和TGF-βRⅡ基因mRNA表达水平,分析TGF-β受体表达水平与湖羊排卵数的关系。【结果】TGF-βRⅠ在生殖器官相对表达量极显著高于肺和肌肉(P＜0.01),TGF-βRⅡ在生殖器官相对表达量极显著高于其它组织(P＜0.01),是卵巢高表达基因;高产组湖羊卵巢组织TGF-βRⅠ与TGF-βRⅡ基因mRNA表达量分别极显著(P＜0.01)与显著(P＝0.011)高于对照组;湖羊卵巢组织TGF-βRⅠ和TGF-βRⅡ基因mRNA表达量与排卵数呈正相关,相关系数分别为0.562 (P＞0.05)和0.711(P＜0.05)。【结论】TGF-β受体在卵巢组织中表达高,其中高产组TGF-βRⅠ和TGF-βRⅡ基因mRNA表达量极显著或显著高于对照组,而且与排卵数呈正相关。     

不同繁殖力湖羊垂体组织BMP/Smad信号通路基因mRNA表达量

湖羊是世界著名的多胎绵羊品种,BMP/Smad信号通路与绵羊生殖有密切关系,为探讨高繁殖力和低繁殖力湖羊垂体组织中BMP/Smad信号通路基因mRNA表达水平差异,本试验选取16只经产湖羊母羊,分为产单羔组和多羔组,发情后屠宰记录卵巢排卵数,并采取垂体组织,利用荧光定量PCR技术对湖羊BMP/Smad信号通路各信号分子基因(包括BMP蛋白家族基因:BMP2、BMP4、BMP7;BMP受体基因:BMPRⅠA、BMPRⅠB、BMPRⅡ;细胞内Smad蛋白家族基因:Smad1、Smad4、Smad5)mRNA在垂体组织中的表达水平进行分析。结果显示,多羔组卵巢排卵数极显著高于单羔组(P0.01);在垂体组织中,BMP2、BMP7、BMPRⅠA、BMPRⅡ、Smad1和Smad4基因表达量在单羔组和多羔组间没有显著差异(P0.05),但是,多羔组BMP4、BMPRⅠB和Smad5基因表达量显著低于单羔组(P0.01),且与卵巢排卵数分别呈不同程度的负相关,说明发情期湖羊垂体组织BMP4、BMPRⅠB和Smad5基因表达量差异可能是引起湖羊较高产羔数的原因之一。     

湖羊生长分化因子9（GDF9）基因组织表达特征、mRNA表达水平与SNPs分析

生长分化因子9(GDF9)是TGF-β超家族的一个成员,在早期卵泡的生长和分化过程中起着重要的调节作用.试验采用RT-PCR和实时荧光定量PCR对湖羊GDF9的组织表达、发情期单羔和三羔湖羊卵巢组织mRNA表达水平进行了研究:用PCR-RFLP法对湖羊群体GDF9外显子1第152位点的多态性进行了分析.组织表达谱分析发现GDF9基因在湖羊的下丘脑、垂体、卵巢、子宫、输卵管、心、肝、脾、肺、肾等组织中均有表达;实时荧光定量PCR结果表明,三羔湖羊卵巢组织中GDF9基因mRNA表达水平显著高于单羔湖羊(P<0.05);PCR-RFLP法没有检测到湖羊GDF9基因cDNA第152处发生的单碱基突变(A→G).研究提示GDF9基因mRNA表达水平与湖羊的繁殖性状有一定的关系,在湖羊群体中的多态性还有待于进一步研究.     

湖羊BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数关系的研究

 【目的】研究湖羊卵巢组织BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数的相关性,筛选影响湖羊多胎性状的候选基因,为揭示湖羊高繁多胎分子遗传机理提供参考。【方法】选取16只经产湖羊母羊,分为产单羔组和多羔组,发情后24～36 h屠宰,取卵巢,计数排卵点,记录排卵数;应用RT-PCR技术检测BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因的组织表达特征,进一步利用实时荧光定量PCR技术分析各基因mRNA在单羔组和多羔组卵巢组织中的表达差异。【结果】BMP2、BMP4和BMP7基因在湖羊母羊卵巢组织内表达,而且在垂体及下丘脑、子宫、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、输卵管组织中均有表达;BMP6基因仅在湖羊母羊卵巢、肾脏、肌肉和输卵管组织中表达。在卵巢组织,多羔组排卵数极显著高于单羔组（P＜0.01）,且多羔组BMP4基因mRNA表达极显著高于单羔组（P＜0.01）,而BMP2、BMP6和BMP7基因mRNA表达在单羔组和多羔组间无显著差异（P＞0.05）;相关分析表明在卵巢组织中,只有BMP4基因mRNA表达与排卵数呈正相关(r = 0.741,P ＜0.05)。【结论】BMP4基因mRNA表达在单羔组和多羔组间差异显著,可能对湖羊排卵数起关键作用,是影响湖羊排卵数的候选基因。