贵州烤烟品种资源对根结线虫的抗性鉴定

为了解贵州烤烟品种资源对根结线虫病的抗性,对贵州省地方烤烟品种资源进行田间根结线虫抗性鉴定。经形态学鉴定试验烟田内根结线虫为南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)和花生根结线虫(Meloidogyne arenria)的混合种群;在225个烤烟品种资源材料中发现有8份材料在该混合种群下表现为高抗、18份材料表现为抗病、31份表现为中抗,其它材料均感病或抗性较差。     

不同烤烟品种(系)对青枯病的抗性鉴定

采用十二孔板法、培养皿小苗法、注射接菌法及菌液灌根法,以病情指数和烟苗危害症状为主要评价指标,对贵州省12个烤烟(Nicotiana tabacum L.)品种(系)进行抗烤烟青枯病[Ralstonia solanacearum(Smith)Yabuuchi et al]鉴定和评价。结果表明,十二孔板法和培养皿小苗法不能反映烤烟的真实抗性,注射接菌法对试验操作要求较高,菌液灌根法鉴定结果较为准确。所测12个品种(系)中达到高抗水平的有贵烟1号、贵烟14号和抵字101,中抗水平的有K346、K326、岩烟97、贵烟6号、贵烟8号和贵烟9号,敏感水平的有红花大金元、长脖黄和南江3号。     

烟草LEA3基因的克隆及序列分析

为从烟草中克隆到与植物抗逆相关的胚胎晚期丰富蛋白(LEA)基因,以番茄LEA3基因为探针,通过电子克隆的方法从烟草栽培品种K326中克隆到2个第3组LEA基因(NtLEA3-1和NtLEA3-2),并对其进行了序列分析.结果表明:2个LEA3基因的cDNA序列均包含完整的开放读码框,分别编码167和166个氨基酸,具有8个LEA3基元序列.亲水性分析表明NtLEA3-1和NtLEA3-2蛋白富含亲水氨基酸,是一种高度亲水性的蛋白,其蛋白二级结构中均以α-螺旋构象为主.NtLEA3-1和NtLEA3-2的氨基酸序列与番茄的一致性最高为79％,与其他已经发现的LEA3蛋白的一致性在42％～62％之间,表明NtLEA3-1和NtLEA3-2是2个新的烟草LEA3基因.     

贵州晾晒烟品种资源对根结线虫的抗性研究

为筛选烟草根结线虫抗性种质资源,对116份晾晒烟种质资源进行了田间抗性鉴定。试验烟田内根结线虫经形态学鉴定为南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、爪哇根结线虫(M.javanica)、花生根结线虫(M.arenaria)的混合种群,鉴定结果发现有6份材料在该混合种群下表现为高抗、20份材料表现为抗病、17份表现为中抗,其他材料均感病或抗性较差。     

两种烟草根结线虫生防菌对土壤中微生物数量的影响

以前期筛选出的对烟草根结线虫防治效果较好的两种担子菌进行田间试验,研究不同处理下烟草根际土壤中可培养真菌、细菌及放线菌的变化。结果表明:两种生防担子菌有效抑制了烟草根际中烟草根结线虫二龄幼虫的数量,还能显著增加土壤中可培养真菌、细菌及放线菌数量;其中,毛头鬼伞菌对土壤中可培养放线菌数量的影响最为显著。     

烟草3个甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆及序列分析

为从烟草中克隆到与植物抗逆相关的甜菜碱醛脱氢酶(EADH)基因,以枸杞BADH基因为探针,通过电子克隆的方法从烟草栽培品种K326中克隆到3个BADH基因(NtBADH1、NtBADH2、NtBADH3),并对其进行了序列分析。结果表明:3个BADH基因的cDNA序列均包含完整的开放读码框,分别编码504个氨基酸,具有醛脱氢酶家族高度保守的十肽(VTLELGGKSP)以及与酶功能有关的半胱氨酸残基(C)。烟草3个BADH与其他物种在蛋白质水平上表现较高的相似性,NtBADH1和NtBADH2在进化上与同科的番茄BADH蛋白距离较近,NtBADH3在进化上与同科的枸杞BADH蛋白距离较近。这些结果为进一步分析该类蛋白的性质和功能,并为植物抗逆基因工程研究提供了基础资料。     

国内外烤烟品种农艺性状的遗传多样性及与SRAP标记的关联分析

选取258份国内外烤烟品种,在2个试验点调查13个农艺性状,利用16对引物组合获得的597个SRAP标记进行分子遗传多样性和群体结构分析,选取适宜的模型进行农艺性状与SRAP标记间关联分析。结果表明,参试品种表型和基因型变异丰富,国内品种的遗传多样性低于国外品种。总材料可分为7个亚群,分类结果与材料的地理来源和遗传背景显著相关,国外材料遗传结构相对复杂。通过比较发现MIM_Q+K和MIM_PCA+K为该群体最优的关联分析模型,共检测到18个SRAP标记与6个农艺性状显著关联(–Log P>2, P<0.01),其中me1/em9-16,me1/em9-36,me4/em9-1与株高、me1/em2-14,me7/em5-34与叶片数、me6/em2-6与脚叶宽、me2/em6-15与腰叶长在不同环境下均显著关联。     

烟草甘露糖结合凝集素基因的克隆及序列分析

为了对植物抗病虫基因工程研究提供依据,以辣椒凝集素基因为探针,通过电子克隆方法从烟草栽培品种K326中克隆甘露糖结合凝集素基因,并对其进行了序列分析。结果表明:从烟草栽培品种K326中克隆出NtMBL1、NtMBL2和NtMBL33种甘露糖结合凝集素基因;3种凝集素cDNA序列均包含完整的开放读码框,编码298个氨基酸,具备B-凝集素结构域,与辣椒凝集素蛋白的一致性较高。经SWISS-MODEL同源模建分析,NtMBL1、NtMBL2和NtMBL3的蛋白模型由8～9个β片层组成的β桶结构,具有与单子叶植物甘露糖结合凝集素相似的空间结构。     

烟草肌醇半乳糖苷合成酶基因NtGolS1的克隆及序列分析

为从烟草中克隆到与植物抗逆相关的肌醇半乳糖苷合成酶基因GolS,以辣椒GolS基因为探针,通过电子克隆法从烟草栽培品种K326中分离出一条编码GolS基因的cDNA序列,暂被命名为NtGolS1.NtGolS1包含一个完整的开放读码框,编码343个氨基酸,具备糖基转移酶保守结构域;序列比对结果表明,NtGolS1蛋白与其他植物的GolS蛋白具有很高的相似性;系统进化树分析表明,NtGolS1与耐旱植物维柯萨的Gols亲缘关系最近.这些结果为进一步研究NtGolS1的性质和功能,并为植物抗逆基因工程研究提供理论基础     

烟草青枯雷尔氏菌连续传代减毒效果研究

采用烟草青枯雷尔氏菌(TR)的菌悬液,连续传代培养,并在含有TTC的培养基上观察弱毒力菌落的百分率。测试0、10、20、30代菌株的生物量曲线观察变化情况。测试0、5、15、25、35代的菌株侵染K326(中等抗性)烟苗的情况并观察其与烟苗相互作用的结果。结果表明:青枯雷尔氏菌经传代35次后,在含TTC的培养基上弱毒力菌株检出率接近100%;生物量随着传代次数的增加而呈现下降的趋势;野生型菌株与传代后菌株对烟苗的萎蔫率观测时间呈现波动性。