重组Taq DNA聚合酶的表达和纯化鉴定

【目的】表达、纯化Taq DNA聚合酶,并检测其扩增性能。【方法】活化含Taq DNA聚合酶基因的菌株JM109,IPTG诱导表达。目的蛋白利用AKTA蛋白纯化系统,依次过Affi-Gel Blue Sepharose,Heparin Sepharose Fast Flow,Q-Sepha-rose Fast Flow,经SDS-PAGE分析,以国外进口Taq酶为标准,采用对比法初略测定酶活性,验证产品质量。【结果】制备的Taq DNA聚合酶具有扩增效率高、纯度高、特异性强、无核酸酶污染、活性稳定等优点。【结论】成功表达纯化Taq DNA聚合酶,其扩增性能达到甚至超过国外同类产品。     

镉胁迫对银条开花期生理生态的影响

为了探讨镉胁迫对银条开花期生理生态的影响,采用盆栽试验方法,研究了镉胁迫对银条叶片生理特性的影响。结果表明:随着Cd浓度的提高,银条叶片叶绿素含量显著降低,Cd浓度与叶片叶绿素含量呈极显著负相关,相关系数r=-0.9852**(P0.01);细胞质膜透性、SOD活性均随镉处理浓度的增加显著升高、相关系数分别为r=0.9850**(P0.01)r、=0.9923*(P0.05);MDA含量、POD活性则先升高再降低,与镉浓度呈显著正相关,相关系数r分别为0.9845**(P0.01)0、.9018*(P0.05)。     

镉胁迫对银条生物量及光合特性的影响

通过盆栽试验,研究了CdCl2胁迫对银条叶片光合特性的影响.结果表明,随着CdCl2浓度的增加,银条生物量下降明显,叶片光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)和气孔导度(Gs)降低,在镉浓度为250 mg/L时分别为对照的25.00%,35.52%,54.02%;水分利用效率(WUE)呈现先升高再降低的变化趋势,而胞间CO2浓度(Ci)只在高浓度(≥200 mg/L)时才逐步升高,但增幅相对较小,在2.40%～9.15%之间.     

高效JM109感受态细胞制备及转化条件的优化

采用不同的转化液制备大肠杆菌(Escherichia coli)JM109感受态细胞,并进行pUC18质粒的转化,考察细菌生长状态、转化液、转化的热激时间和转化后所用培养基对转化率的影响.结果表明,菌液A600nm为0.705时采用TB转化液制备感受态细胞,在42℃热激45 s,转化后采用SOC培养基振荡培养,转化效率最高,可达8.59×108 CFU/μg质粒.     

月季叶片愈伤组织的诱导

以月季叶片为外植体,研究不同激素配比对月季叶片愈伤组织诱导的影响及愈伤组织诱导的影响因素。结果表明,月季叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS 2,4-D5.0 mg/L TDZ0.5 mg/L;此外,叶片幼嫩、大小适中、暗培养条件均有利于愈伤组织的形成。     

人源白细胞介素(h-IL2)基因克隆及原核表达的研究

构建人源白介素(h-IL2)基因的表达载体,并尝试在原核细胞中诱导表达,以用于进一步重组蛋白纯化和抗体生产.以h-IL2基因为模板,采用PCR技术扩增h-IL2基因,连接到pMD-18T载体中构建克隆载体,转化到感受态DH5α,提取质粒PCR、双酶切验证连接成功,经DNA测序鉴定基因序列与GenBank数据库收录h-I...     

黄和平月季植株再生体系建立研究

以试管苗的幼嫩小叶为外植体,探讨了黄和平月季通过愈伤组织建立植株再生体系的方法.结果表明:2,4-D能有效诱导无菌小叶产生愈伤组织,经5.0 mg/L 2,4-D光下诱导20 d后,愈伤组织诱导率最高可达93.33%,且其愈伤质量优.将生长良好的愈伤组织转至TDZ 0.5～2.0 mg/L的MS培养基上,发现黑暗培养8～16 d均能诱导愈伤组织产生不定芽,但暗培养时间为16 d时,愈伤组织容易褐化死亡.在含1.2 mg/L TDZ的MS培养基上黑暗培养12 d后其不定芽诱导率可达87.33%,而光下培养时愈伤组织有生根现象,未能产生不定芽.     

农杆菌介导的SeNHX1基因转化月季愈伤组织的研究

Pink Peace’rose was used to study the optimum conditions for transferring the SeNHX1 gene into the callus. The results showed that the optimal medium was MS+2,4-D 5.0 mg·L^-1 + TDZ 0.5 mg·L^-1. Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation was able to take the target gene into callus and the blue spots were found. The optimum conditions for the transient expression of gusA gene are as following: bacterium density of OD was 0.5, infection time was 20 min, culture time was 3 days. Adding 100 μmol·L^-1 AS, the frequency of transient expression of GUS gene was the highest, which reached about 85% in present study.     

粉和平月季植株再生体系建立研究

以试管苗的幼嫩小叶为外植体,探讨了粉和平月季通过诱导愈伤组织建立植株再生体系的方法。结果表明:2,4-D能有效诱导无菌小叶产生愈伤组织,经5.0mg/L的2,4-D光下诱导愈伤20d后,愈伤组织诱导率最高可达91.11%,且其愈伤质量最优。将生长良好的愈伤组织转至TDZ浓度为0.5～2.0mg/L的MS培养基中发现,暗培养8～16d均能诱导愈伤组织产生不定芽,但暗培养时间超过16d愈伤组织容易褐化死亡。在含1.2mg/LTDZ的MS培养基上暗培养14d后其不定芽诱导率可达30%。将生长良好的不定芽转入壮苗培养基MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.01mg/L中培养25d左右,组培苗芽枝叶粗壮,生长旺盛;将长至2～3cm长的健壮小苗转入生根培养基,生根率最高仅为8%。     

不同消毒方式及生长调节剂浓度对红双喜月季组培的影响

为了对红双喜月季的组织快繁培养和工厂化育苗提供参考,以红双喜茎段为外植体,研究了外植体消毒方式、培养基类型以及生长调节剂NAA、6-BA等因素对腋芽诱导、腋芽生长、增殖及生根的影响.结果表明,消毒效果以75%酒精处理外植体1 min,再用0.1%HgCl2消毒8 min效果最好;腋芽萌发率以20 mg/L 6-BA和0.01 mg/L NAA混合作用最高,达76.19%;6-BA和NAA能有效提高芽的增殖系数,以1.5 mg/L 6-BA和0.1 mg/L NAA混合作用芽的增殖系数最高,达2.24;低浓度的无机盐(1/2 MS)和低浓度的生长调节剂(0.01 mg/L IBA)混合作用有利于红双喜根的分化和生长.