分子佐剂鞭毛素对弓形虫SAG1蛋白抗体应答的影响

将沙门氏菌鞭毛素和弓形虫免疫优势表面抗原1(SAG1)融合表达,研究其在小鼠上激发的体液免疫应答.首先,采用PCR扩增SAG1片段.其次,将SAG1连接到原核表达载体pET-28a中构建表达质粒pET-28a-SAG1;连接到实验室已有的pET-28a鞭毛素质粒中构建表达质粒pET-28a-F-SAG1;质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中并进行表达.将纯化后的蛋白免疫小鼠,每隔2周免疫一次,共免疫3次,第3次免疫后15 d取小鼠血清.最后,采用蛋白印迹检测蛋白的大小;用酶联免疫吸附方法检测血清中多克隆抗体的效价.结果表明,诱导出的SAG1蛋白大小为30 ku,F-SAG1大小为70 ku.酶联免疫吸附方法检测的D450 nm均为阴性对照的两倍,表明该多克隆抗体具有较高效价.可见,鞭毛素可以作为分子佐剂促进弓形虫亚单位疫苗的体液免疫应答.     

禽用DNA疫苗免疫效果增强的策略

对于人和动物的传染病来说,DNA疫苗免疫是一种很有希望的免疫方式。经过25年的发展,已经上市的核酸疫苗仍屈指可数。禽用核酸疫苗一直是禽类疫苗的研究热点,文中描述提高核酸疫苗免疫效果的方式：接种途径,疫苗剂量及首免时间,增加宿主细胞对质粒的摄入,添加免疫增强分子,优化质粒骨架和密码子,疫苗抗原的选择,异源性的首免-加强免疫策略。     

巨型艾美耳球虫IMP1基因的原核表达及多克隆抗体的制备

免疫映射蛋白1(IMP1)是一种从巨型艾美耳球虫中发现的蛋白,具有良好的免疫原性和免疫保护性.本试验通过Em IMP1基因的克隆、原核表达以及多克隆抗体的制备,为后续深入研究该蛋白的生物学及免疫学功能奠定基础.首先,从未孢子化的巨型艾美耳球虫新疆株卵囊中提取总RNA,反转录合成c DNA,PCR扩增Em IMP1基因片段.其次,将Em IMP1基因扩增片段连接到原核表达载体p ET-28a构建表达质粒p ET-28a-Em IMP1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株并进行表达;将纯化后的蛋白与等量弗氏佐剂乳化后皮下注射至2只新西兰大白兔体内,每隔2周免疫一次,一共免疫4次后取得的兔血清即为多克隆抗体.最后,用所获得的多克隆抗体,对纯化后的Em IMP1进行免疫印迹试验鉴定,用酶联免疫吸附测定法检测多克隆抗体的效价.结果表明,克隆出的Em IMP1基因的全长为1 140 bp,诱导出的蛋白大小为70 ku,且该蛋白在上清液和包涵体中均有存在.免疫印迹试验检测结果显示,用上述方法制备的多克隆抗体具有良好的特异性,酶联免疫吸附测定法检测结果表明该多克隆抗体具有高效价.因此,可通过原核表达蛋白Em IMP1免疫兔子制备特异性好且效价高的多克隆抗体.