一种高效构建多位点突变重组质粒的方法

 定点突变技术是蛋白质结构与功能研究的必要手段之一, 随着蛋白质结构生物学深入发展, 研究中要同时构建多位点、批量表达载体, 研究者基于重叠延伸PCR和双接头PCR方法, 优化建立一种高效构建多位点突变重组表达质粒的方法。     

禾谷镰刀菌14α-脱甲基酶的原核表达与纯化

近年来,三唑类杀菌剂成为生产上防治小麦赤霉病(Fusarium Head Blight,FHB)的主要药剂,主要作用于甾醇生物合成中的14α-脱甲基酶(CYP51),使真菌麦角甾醇的合成受阻,从而破坏细胞膜功能,起到杀菌的功能.本研究的目的是采用结构生物学的方法探究禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)中14α-脱甲基酶(FgCYP51B)的三维结构、生化功能以及其与三唑类杀菌剂的互作机制,进一步阐释禾谷镰刀菌对三唑类杀菌剂潜在的抗性风险.以禾谷镰刀菌(F.graminearum)的cDNA为模板,根据14α-脱甲基酶基因(FgCYP51B)序列设计特异性引物进行PCR扩增,克隆了FgCYP51B基因并构建了3个全长表达载体pHAT2-CYP51B、pETM-20-CYP51B和pETM-30-CYP51B以及3个蛋白截短体表达载体pHAT2-CYP51B50-527,pETM-20-CYP51B50-527和pETM-30-CYP51B50-527,将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3),并利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.结果表明:全长FgCYP51B蛋白在BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中均不表达;重组蛋白pHAT2-CYP51B50-527在大肠杆菌中不表达,而重组蛋白pETM-20-CYP51B50-527和pETM-30-CYP51B50-527成功表达,并通过亲和层析、离子交换与分子筛对重组蛋白进行纯化.该蛋白的表达与纯化为其结构功能的研究奠定了基础.     

刺槐白粉病病原菌鉴定

<正>刺槐(Robinia pseudoacacia L.)又名洋槐,属蝶形花科刺槐属的落叶乔木。原生于北美洲,现被广泛引种到亚洲、欧洲等地。刺槐白粉病是刺槐叶部、嫩枝病害,能降低叶片光合作用,严重的引起叶部畸形、茎尖和枝梢枯死。Braun最早记载中国刺槐白粉病病原菌为Microsphaera subtrichotoma~([1,2])。刺槐白粉病在日本也有报道,引起白粉病的病原菌为Erysiphe     

起点高是新茶园早成园早投产见效快的基础

百色茶场“八五”期间新种茶园1000亩，其中最早于1993年10月份种植福云六号176．1亩（扦插苗），二队种子直播凌云白毛茶183．6亩。176．1亩福云六号于1995年采摘特级（一穿一叶）鲜叶9958．05公斤，平均每亩采特级鲜叶56．5公斤，折干茶12．56公斤，按当年平均卖价亩产值为564．22元（12．56×44．9元），1996年每亩采摘特级鲜叶85．04公斤，拆干茶18．89公斤，按当年平均卖价计，每亩产值为848．53元，比1995年收入增长50％。其中一队35亩，1995年平均亩产干茶20．2公斤，产值906元，1996年亩产干茶28．59公斤，产值达1283．门元，比1995…     

茶树施用微生物肥料几种不同用量配方田间试验小结

太阳牌高能长效微生物肥料是北京田力宝科技研究所监制，由广东省东莞市大朗微生物肥料厂生产，我场头次引进的新产品，据厂家介绍，其肥效期长达6个月以上，相当于含氮28％、磷28％、钾20％的化肥效力，该肥在茶叶上使用尚未见报道。为了探索该肥在茶叶上的增产效果，我们于1996年4月中旬至8月底，在桂西山区的百色茶场进行田间小区试验，取得好的试验效果，现将试验结果小结于后。一、试验材料1、供试肥料。高能长效微生物肥料（太阳牌、广东省东莞市大朗微生物肥料厂生产）2、对照肥料。尿素（进口、卡塔尔产）3、空白对照。4、试验时间…     

主客观结合确定网络课程评价指标权重

通常，指标权重的确定方法是根据决策者的先验知识来确定的，其中比较常用的方法有德尔菲法及层次分析法，这些方法受决策者主观因素的影响太大。本文将粗集理论中属性重要度的概念引入网络课程评价中的权重确定过程，提出将决策者先验知识给定的权重同粗集理论确定的属性重要度结合起来作为最终确定网络课程评价指标权重的方法。     

红辣椒火了长建村

在美丽的姜家甸大草原腹地,有一个不足600人,人均耕地不足2亩的小村庄,可就是这样一个几年前还是名不见经传、人均收入不足2000元的偏僻小村,在短短的5年的时间,一下子成为远近闻名、人均收入达8000元的富裕村。他,就是大安市新平安镇长建村。是什么助推小村飞速发展?日前,记者探访了该村。也找到了答案,     

葡萄溃疡病菌转化子致病力快速评价体系的建立

为探索快速、稳定、高效的葡萄溃疡病菌转化子致病力评价方法,分别采用无伤接种、昆虫针针刺接种、打孔器打孔接种等3种接种方法,将随机选取的来自葡萄溃疡病菌REMI转化子库的50株转化子分别接种‘富士’苹果果实和‘夏黑’葡萄一年生绿枝条,测量病斑大小.结果表明,用葡萄绿枝条接种能区分不同转化子的致病力,而苹果果实则仅能将致病力减弱的转化子筛选出来.在葡萄绿枝条上致病力减弱的转化子有96.15％在‘富士’苹果果实上的致病力也是减弱的,而用苹果果实接种未筛选到致病力增强转化子.上述结果为获得致病力突变体奠定了基础.     

禾谷镰孢菌FgCYP51B蛋白Y137H影响分生孢子及子囊孢子发育

<正>小麦赤霉病(Fusarium Head Blight,FHB),主要是由镰刀菌属真菌引起的一种流行性毁灭性病害。在世界各小麦种植区尤其是温暖潮湿和半潮湿地区发生最为严重~([1,2])。它不仅能够降低小麦产量,其染病麦粒中还会产生对人畜健康严重危害的真菌毒素~([3])。在不同的地区由于气候因素和地理环境的不同,分布着不同的致病菌株。在我国,