不同包装材料对辐照乳饼保存期影响的研究

 新鲜乳饼分别采用高阻氧铝箔袋和耐高温3层透明复合袋（PVDC）包装,经60Coγ 8kGy剂量辐照后,研究在1个月常温贮藏周期中乳饼的感官性状、水分、pH值、酸价指标的变化,探讨不同包装材料对辐照乳饼保存期的影响。结果表明：在1个月常温贮藏周期中,高阻氧铝箔袋和耐高温3层透明复合袋对辐照乳饼保存期影响差异不显著,铝箔装的乳饼感官性状稍好于PVDC复合装的乳饼,但不易观察到内容物变化,且成本高,生产中宜采用耐高温3层透明复合袋（PVDC）包装。     

RNAi及其在哺乳动物中的应用*

 RNA干扰(RNAi)是由特定双链RNA(dsRNA)引发的转录后基因沉默,广泛存在于真菌、植物和动物中,它是近年来迅速发展起来的高效、特异、易操作的基因阻断技术,在功能基因组的研究中有着广阔的应用前景。研究表明,断裂dsRNA产生的小干扰RNA(siRNA)可抑制哺乳动物基因表达。从哺乳动物整体水平应用研究的角度,对RNAi的分子机制、生物学功能和特点,siRNA导入体内的方法以及应用等方面的研究作一综述。     

功能基因组学的研究方法

基因组学研究已经由以全基因组测序为目标的结构基因组学转向以基因功能鉴定为目标的功能基因组学研究。作者综述了功能基因组学的内容、主要的新方法和新技术，如SAGE、ESTs、SSH、微阵列、生物信息学、RNAi等，并对其发展进行了简单展望。     

稳定表达IL-10的PK-15细胞的构建及其在PCV2增殖中的应用

【目的】 研究白细胞介素-10（IL-10）对猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）复制的影响,筛选PCV2高感染性细胞系和提高PCV2病毒滴度,为后续疫苗的研发及IL-10在PCV2感染中的作用研究提供参考。【方法】 利用PCR技术扩增猪IL-10基因,将目的基因与慢病毒表达载体（pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP+Puro）进行连接,获得重组质粒pCDH-CMV-IL-10,将其与包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染293T细胞进行慢病毒包装。用收集的慢病毒液感染PK-15细胞,经嘌呤霉素筛选后得到细胞株PK-15-IL-10,对照组细胞分别命名为PK-15-pCDH和PK-15。PCV2感染PK-15-IL-10、PK-15-pCDH和PK-15细胞株后,在24、48和72 h分别收集细胞液,利用CCK-8检测细胞活力。利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测IL-10基因的表达水平和PCV2的复制情况;利用间接免疫荧光试验（IFA）观察PCV2在细胞中的复制情况及测定PCV2的病毒滴度（TCID₅₀）。【结果】 试验成功构建了重组质粒pCDH-CMV-IL-10,将其与包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染293T细胞后,48 h时细胞状态最好,荧光最强。分别收集共转染48和72 h的慢病毒液上清感染PK-15细胞,pCDH-CMV-IL-10组的荧光最强,将其在嘌呤霉素浓度为2.5 μg/mL的完全培养基中继续培养,获得仍有绿色荧光的稳转细胞株。实时荧光定量PCR和Western blotting检测发现,IL-10基因在pCDH-IL-10细胞株中的表达量明显高于对照组PK-15-pCDH和PK-15,PCV2的拷贝数增加了4倍,复制能力增强,且将病毒稀释连续传3代后,PK-15-IL-10细胞中的PCV2极显著高于PK-15细胞（P<0.01）。细胞增殖试验表明,猪IL-10基因在细胞中过表达对细胞活力无明显影响;IFA结果表明,PK-15-IL-10细胞中的荧光比PK-15细胞更强,PCV2在PK-15-IL-10细胞中的TCID₅₀在感染后48 h极显著高于PK-15细胞（P<0.01）。【结论】 本研究成功构建了pCDH-CMV-IL-10的慢病毒表达载体,并利用其感染PK-15细胞,继续培养后筛选出过表达IL-10的PK-15-IL-10细胞株,用PCV2感染该细胞株能促进PCV2在PK-15细胞中的复制。本试验结果为后期疫苗研究提供了参考,为进一步研究IL-10对PCV2在PK-15细胞中复制的影响奠定了基础。     

如何使检疫受训犬快速度过反复期

正在正常训练的情况下,检疫受训犬在训练的过程中出现了不嗅、假嗅、搜索不积极的情况属于反复。出现反复的原因有很多,比如:训导员训练手法单一、动作呆板;训练搜索形式、环境和嗅源的单一,以及单调枯燥乏味的训练等。当受训犬出现反复之后,只要掌握一定的方式方法,就能很快地度过反复期并且在此基础上上一个新的台阶,反之,若不注意方式方法的话,就很可能会延长反复期,更有甚者可能使受训犬达不到训练要求,以至于有被淘汰的风险。检疫受训犬快速度过反复期训导员的因素是关键。训导员的因素是     

两种培养条件下重组杆状病毒表达小反刍兽疫病毒N蛋白的丰度

为了在重组杆状病毒上获得高丰度表达的小反刍兽疫病毒（PPRV）N蛋白,利用细胞贴壁培养和悬浮培养法培养重组杆状病毒Vbacmin-PPRV-N 120 h,用显微镜观察不同时间点细胞形态变化,随后在培养24、48、72、96、120 h时分别收集培养液,以ELISA方法检测PPRV N蛋白表达量,并用SPSS软件对数据进行统计分析。显微镜下观察发现,在感染重组杆状病毒后,两种方式培养的细胞随着时间增加,均由形态大小均匀、圆形、透亮、折光性好,变为大小不均匀、折光性差,并且出现了很多细胞碎片。根据ELISA检测结果,摇瓶悬浮培养条件下PPRV N蛋白的表达量显著高于贴壁培养,摇瓶悬浮培养的昆虫细胞蛋白表达量在96 h达到最高峰,120 h蛋白表达量开始下降,贴壁培养的昆虫细胞蛋白表达量在120 h达到最高峰。研究表明,用昆虫杆状病毒系统大规模表达PPRV N蛋白时更适合用摇瓶悬浮培养方法。本研究为优化昆虫细胞表达PRRV N蛋白的培养条件提供了参考。     

猫传染性腹膜炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为快速、灵敏、准确检测猫传染性腹膜炎病毒（feline infectious peritonitis virus,FIPV）,以FIPV N基因为靶序列设计合成特异性引物及TaqMan探针,建立了一种FIPV实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行了试验。结果表明：该方法灵敏度高,最低检测限为3.4 copies/μL;特异性强,与狂犬病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒、猫细小病毒、犬流感病毒、犬瘟热病毒等均无交叉反应;重复性好,批内变异系数为0.99%~4.13%,批间变异系数为1.29%~4.64%。以上结果说明,本试验建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法特异、敏感、重复性好,适用于FIPV的快速检测。     

两种蓝舌病病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较

为验证昆明海关检验检疫技术中心等单位联合研发的蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒(YN BTVB-ELISA)的临床适用性,将YN BTV B-ELISA检测试剂盒与法国ID.VET公司研制的蓝舌病病毒ELISA抗体检测试剂盒(ID.VET C-ELISA)进行比对检测试验。本试验对1 278份牛羊血清进行比对检测,另外对1份已知背景的阳性血清倍比稀释后进行检测,比较两种试剂盒的敏感性。结果显示:YN BTV B-ELISA检测试剂盒与ID.VET C-ELISA试剂盒的符合率、相对敏感性、相对特异性分别是99.92%、99.63%、100%;将两者一致性用Kappa值表示,Kappa=0. 998;YN BTV B-ELISA、ID.VET C-ELISA检测阳性血清效价的最低稀释倍数分别是1:128、1:16。试验表明,YN BTV B-ELISA检测试剂盒与ID.VET C-ELISA检测试剂盒的符合率、相对敏感性、相对特异性均较高,并且YN BTV B-ELISA检测试剂盒敏感性更高,在蓝舌病病毒抗体检测中具有良好的实用价值。     

RNA干扰技术的应用研究进展

RNA干扰是指由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)启动的序列特异的转录后基因沉默现象,广泛存在于真菌、植物和动物中。RNA干扰技术是近年来迅速发展起来的高效、特异、易操作的基因阻断技术,在功能基因组的研究中有着广阔的应用前景。文章对RNA干扰的分子机制、生物学功能和RNA扰技术的优势以及其在功能基因组、基因治疗、转基因动物研究、药物开发等方面的应用做一综述。     

辐照保鲜乳饼对小鼠血液常规和生化指标的影响

真空包装的新鲜乳饼经8和16 kGy剂量^60Co辐照后,按比例添加到小鼠基础日粮中饲喂小鼠,探讨辐照乳饼对小鼠血液常规和生化指标的影响。结果表明：辐照乳饼对小鼠血液常规、生化指标未产生不良影响,小鼠血液常规、生化指标均在正常范围内,试验组与对照组各指标差异不显著。