不同海拔海兰褐蛋鸡肺动脉和肺静脉结构对比

为了对比海兰褐蛋鸡在不同海拔相同饲养条件下其肺动脉和肺静脉结构差异,试验选取山西省武乡县(较低海拔,海拔950m)、甘肃省榆中县(中等海拔,海拔1720m)和青海省湟源县(较高海拔,海拔2660m)常规饲养的180日龄海兰褐蛋鸡20只,雌雄各半.收集肺动脉和肺静脉,制作常规石蜡切片,HE染色,显微观察、拍照,Image Proplus 6.0测量肺动脉和静脉血管中膜厚度、平滑肌层数、平滑肌层厚度.结果显示,海兰褐蛋鸡肺动脉和肺静脉血管中膜厚度随着海拔的升高显著增加(P<0.05);中海拔和较高海拔海兰褐蛋鸡肺动脉和静脉结构血管平滑肌层数显著多于较低海拔(P<0.05),而中海拔和较高海拔对比差异不显著(P>0.05);较高海拔海兰褐蛋鸡平滑肌厚度显著大于较低海拔和中海拔(P<0.05),而较低海拔和中海拔对比无显著差异(P>0.05).说明海兰褐蛋鸡肺动脉和肺静脉中膜厚度与其生存海拔存在一定的正相关性,海兰褐蛋鸡通过肺动脉和肺静脉中膜平滑肌增多来适应高海拔低氧环境.     

牦牛胚胎发育早期部分器官组织形态学观察

为了研究牦牛胚胎发育早期部分器官的形态学与组织学变化,试验采集1~4月龄牦牛胚胎,制作肾脏和性腺的组织切片,用光学显微镜进行观察测量。结果表明:与1月龄后期相比,4月龄牦牛胚胎体长增加了4倍,体重达到245.60 g,心脏、肺脏重量增加比肝脏快。卵巢皮质中分布有大量原始生殖细胞,随着月龄增加,髓质中红细胞、梭状细胞增多。睾丸中先有两种不同的原始生殖腺管腔,之后逐渐分化生成生殖小管。肾脏周围被被膜包裹,2月龄牦牛胚胎被膜上有脂肪细胞,月龄较小的胚胎肾小球内红细胞较少,肾小囊较宽,4月龄牦牛胚胎肾脏皮质、髓质分界清楚,有肾乳头形成。     

大豆异黄酮对牦牛卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响

【背景】大豆异黄酮主要包括染料木素和大豆苷元,发挥类雌激素样作用,能够清除自由基,促进细胞增殖。颗粒细胞是卵泡内重要的细胞群体,其生理状态与卵巢功能直接相关。颗粒细胞凋亡常引起卵泡闭锁。牦牛是青藏高原特有物种之一,但其繁殖率低,其具体机制尚不明确。卵巢颗粒细胞是研究雌性动物生殖调控机制的理想细胞模型。【目的】探讨大豆异黄酮对牦牛卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响,为大豆异黄酮的作用机制研究提供依据。【方法】分离培养牦牛卵巢颗粒细胞,FSHR免疫细胞化学染色鉴定,MTT法测定细胞增殖情况,绘制生长曲线;细胞传代后添加不同浓度染料木素或大豆苷元（0,1 000,2 000,3 000,4 000和5 000 pg·mL^-1）,选择染料木素或大豆苷元最佳作用浓度分别处理二代颗粒细胞48 h,收集细胞培养液,ELISA法检测培养液中雌二醇（E₂）和孕酮（P₄）浓度;同时收集细胞,提取总RNA,实时荧光定量PCR法检测细胞增殖相关基因AKT1和细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bad、Fas、FasL、Caspase-3和p53的表达水平。【结果】牦牛卵巢颗粒细胞呈典型的上皮样细胞生长特性。接种后2 h开始贴壁,12 h出现聚集生长;24 h细胞体积较大,呈长梭形、星形或多边形;48 h细胞呈“铺路石”样单层排布;卵巢颗粒细胞特异标志蛋白FSHR免疫细胞化学染色阳性,表明,分离培养的是卵巢颗粒细胞;MTT法检测细胞增殖情况,牦牛卵巢颗粒细胞呈“S”形曲线生长：培养24 h内生长缓慢,处于潜伏生长期;24—48 h细胞增殖较快,进入指数生长期;48—120 h细胞平稳增殖,处于平顶期;120 h后活细胞密度开始下降,细胞进入退化衰亡期;第二代细胞生长较快,24 h进入指数增殖期,故试验选择第二代颗粒细胞进行。MTT法检测不同浓度染料木素或大豆苷元对细胞增殖的影响,结果,添加3 000 pg·mL^-1染料木素或大豆苷元作用48 h后,细胞活力均极显著增强（P<0.01）;染料木素和大豆苷元均促进颗粒细胞分泌雌二醇,大豆苷元促进效果显著（P<0.05）;染料木素显著抑制颗粒细胞分泌孕酮（P<0.05）;qRT-PCR结果显示,染料木素和大豆苷元均显著上调颗粒细胞增殖调控相关基因AKT1和凋亡相关基因Bcl-2、Bax、p53和Fas的表达（P<0.01）,显著下调凋亡相关基因Bad和FasL的表达（P<0.01）,并显著上调Bcl-2/Bax比值（P<0.01）抑制细胞凋亡。此外,染料木素抑制Caspase-3表达（P<0.01）而大豆苷元促进Caspase-3表达（P<0.01）。【结论】分离培养了牦牛卵巢颗粒细胞,为牦牛雌性生殖调控机制研究提供了有效的细胞模型。试验结果表明,染料木素和大豆苷元抑制牦牛颗粒细胞分泌孕酮,促进细胞增殖,且主要通过上调Bcl-2、p53、Fas和Bcl-2/Bax,以及下调Bad和FasL的表达,保护卵巢颗粒细胞免于凋亡。