中药“救必应”水提取物对产ESBLs大肠杆菌耐药性的影响

“救必应”为冬青科植物铁冬青的树皮或根皮水浸出物制备,具有广谱的抗菌作用.为研究中药“救必应”对产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠杆菌耐药性的影响,本研究将产ESBLs的E.coli在亚抑菌浓度的中药“救必应”中传代,采用微量稀释法测定抗生素对产ESBLs的E.coli最小抑菌浓度(MIC),并通过透射电镜观察中药作用后细菌形态学变化.结果显示,中药“救必应”可以显著降低产ESBLs的E.coli对阿莫西林、加替沙星、诺氟沙星、盐酸左旋氧氟沙星、乙酰甲喹、磺胺间甲氧嘧啶钠、克林沙星、氟苯尼考的MIC值,并且MIC均降低4倍;此外,中药作用后可以引起细菌细胞壁的皱裂、干瘪、折叠、缩短等形态变化.     

鸡血藤总黄酮对大肠杆菌败血症的治疗作用

为研究鸡血藤总黄酮对小鼠大肠杆菌败血症的治疗作用,本研究采用腹腔注射大肠杆菌菌液的方法建立小鼠大肠杆菌败血症模型,1 h后灌胃给予不同剂量鸡血藤总黄酮,12 h后观察小鼠临床表现并进行评分,然后剖杀小鼠,比较肝脏、胸腺和脾脏的外观、脏器指数和肝脏病理切片结果,检测各项血液常规指标,分析血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)及乳酸脱氢酶(LDH)水平,测定血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-2、IL-6、IL-10及肿瘤坏死因子α(TNF-α)等炎性细胞因子的水平。结果发现,腹腔注射大肠杆菌后引起小鼠被毛粗乱、精神沉郁、眼睛红肿、眼部分泌物增加且呼吸急促等症状,部分严重的小鼠出现抽搐、休克现象,肝脏、胸腺、脾脏出现萎缩、变小的现象,且脏器指数下降。肝脏病理切片可观察到肝索紊乱、肝窦增大、细胞边缘不清晰、部分区域炎性细胞浸润。血液中白细胞(WBC)、淋巴细胞(LYM)、血红蛋白(HGB)、红细胞(RBC)和血小板(PLT)等指标水平发生显著改变(P<0.05),且血清中ALT、AST、LDH及炎性细胞因子等水平显著升高(P<0.05)。而鸡血藤总黄酮和阿米卡星处理可改善上述临床表现,抑制相关指标的改变,使其趋于与对照组相似水平。以上结果表明,鸡血藤总黄酮可通过提高机体免疫水平及抑制炎性反应减轻大肠杆菌败血症引起的机体损伤。     

原儿茶酸或绿原酸与抗菌药联用对鱼源链球菌的抑菌效果

[目的]探讨原儿茶酸或绿原酸与抗菌药联用对鱼源链球菌的抑菌效果,为鱼源链球菌病的综合防治提供参考依据.[方法]采用微量二倍稀释法测定原儿茶酸、绿原酸及各种抗菌药对鱼源链球菌的最小抑菌浓度(MIC),并以1/2MIC的原儿茶酸或绿原酸分别联合抗菌药诱导鱼源链球菌进行传代培养,然后使用微量棋盘稀释法测定原儿茶酸或绿原酸与抗菌药联合作用后的部分抑菌浓度指数(FICI).[结果]原儿茶酸和绿原酸对鱼源链球菌的MIC分别为2500和6000 μg/mL,以1250 μg/mL的原儿茶酸和3000 μg/mL的绿原酸分别与痢菌净、阿米卡星、粘菌素、磺胺间甲氧嘧啶钠、克林沙星和磷霉素等抗菌药联合诱导鱼源链球菌传代后,除磺胺间甲氧嘧啶钠外,其他5种抗菌药对传代获得菌株的MIC明显降低.原儿茶酸与抗菌药配伍后的FICI分别为0.500、0.750、0.516、1.125、0.140和0.516,绿原酸与抗菌药配伍后的FICI分别为0.501、0.625、0.501、>2.000、0.140和0.501.依据FICI的判定标准可知,原儿茶酸与痢菌净和克林沙星配伍呈协同效应,与阿米卡星、粘菌素和磷霉素配伍呈相加效应,与磺胺间甲氧嘧啶钠配伍表现为无关效应;绿原酸与阿米卡星和克林沙星配伍呈协同效应,与痢菌净、粘菌素和磷霉素配伍呈相加效应,与磺胺间甲氧嘧啶钠配伍则呈拮抗效应.[结论]原儿茶酸或绿原酸与抗菌药配伍后能增强大部分抗菌药对鱼源链球菌的抑菌活性,呈协同或相加作用,可在水产养殖生产中推广应用.     

救必应水提取物对产ESBLs细菌的抑菌机理研究

为了探讨救必应水提取物的抑菌作用及抑菌机理,采用2倍微量稀释法和琼脂平板稀释培养计数法,测定救必应水提取物对产ESBLs(extended spectrum β-lactamases)细菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC),通过对细菌生长曲线、细菌超微结构、细胞壁和细胞膜通透性变化试验、核酸合成抑制试验研究救必应水提取物的抑菌机理。结果表明,与不添加提取物的对照组相比,救必应水提取物能够影响细菌的生长规律,使细菌破损严重,细胞壁和细胞膜通透性增加,细胞质外渗,菌液中AKP含量、可溶性蛋白含量增多、大肠杆菌DNA荧光强度明显减弱。研究表明,救必应水提取物的抑菌机理是通过细菌细胞壁和细胞膜通透性的变化,抑制细菌核酸的合成实现的。     

大肠杆菌与粪肠球菌总蛋白不同提取方法的比较研究

为了探讨不同裂解方法对大肠杆菌及粪肠球菌蛋白质提取效果的影响,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对SDS裂解法、超声裂解法、试剂盒法提取细菌蛋白质效果进行了比较。结果表明:试剂盒法所提取的蛋白质丰度高于其他方法,且重复率高。说明加入含蛋白酶抑制剂混合物、溶菌酶、DNase酶的试剂盒裂解液有助于提高蛋白质的提取率。     

淫羊藿水提取物联合抗菌药对耐药大肠杆菌的体外抑制效果

【目的】探究淫羊藿水提取物联合抗菌药对耐药大肠杆菌的体外抑菌效果,为兽医临床中西联合用药提供参考依据,也为中药在抑制耐药菌株上的开发研究打下基础。【方法】采用二倍微量肉汤稀释法测定淫羊藿水提取物及各抗菌药对产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC),然后以微量肉汤棋盘稀释法测定淫羊藿水提取物与抗菌药联用后的部分抑菌浓度指数(FICI)。【结果】淫羊藿水提取物与粘杆菌素、头孢曲松、头孢他啶、头孢噻呋、阿莫西林、磷霉素、阿米卡星、氟苯尼考、乙酰甲喹、林可霉素联用后能有效降低药物的MIC,对应的MIC均降低4倍以上,联合用药的FICI分别为0.13、0.26、0.26、0.25、0.51、0.51、0.50、0.75、0.75和0.75,对产ESBLs大肠杆菌的抑制效果表现出协同或相加作用;以其联合诱导产ESBLs大肠杆菌传代,从第1代即能明显降低这些抗菌药的MIC,且稳定至第3代。【结论】淫羊藿水提取物与粘杆菌素、头孢他啶、头孢曲松、头孢噻呋、阿莫西林、磷霉素、阿米卡星、氟苯尼考、乙酰甲喹、林可霉素联用是通过协同或相加作用而提高抗菌药对产ESBLs大肠杆菌的抑制效果,但不宜与磺胺类、喹诺酮类联合用药。     

中药野菊花提取物与抗菌药联合对产ESBLs大肠杆菌抑制效果研究

试验旨在探讨野菊花提取物与抗菌药联合作用对产超广谱β-内酰胺酶（extended spectrum β-lactamases, ESBLs）大肠杆菌的体外抑制效果,为野菊花的进一步开发利用提供理论依据。采用2倍微量稀释法和中西药联合诱导传代法测定野菊花提取物、抗菌药及联合作用后的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）。结果显示,野菊花水提物对该耐药大肠杆菌的MIC值为250 mg/mL,且在野菊花水提物亚抑菌浓度（1/2 MIC）作用下进行中西药联合传代,其与头孢曲松钠、头孢噻呋钠、头孢噻肟钠、氟苯尼考、痢菌净、阿米卡星、林可霉素7种抗菌药联合作用后,抗菌药的MIC值明显降低。表明野菊花水提物能够显著降低产ESBLs大肠杆菌对部分抗菌药的敏感性。     

鸡血藤总黄酮对大肠杆菌败血症的治疗作用

为研究鸡血藤总黄酮对小鼠大肠杆菌败血症的治疗作用,本研究采用腹腔注射大肠杆菌菌液的方法建立小鼠大肠杆菌败血症模型,1 h后灌胃给予不同剂量鸡血藤总黄酮,12 h后观察小鼠临床表现并进行评分,然后剖杀小鼠,比较肝脏、胸腺和脾脏的外观、脏器指数和肝脏病理切片结果,检测各项血液常规指标,分析血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)及乳酸脱氢酶(LDH)水平,测定血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-2、IL-6、IL-10及肿瘤坏死因子α(TNF-α)等炎性细胞因子的水平。结果发现,腹腔注射大肠杆菌后引起小鼠被毛粗乱、精神沉郁、眼睛红肿、眼部分泌物增加且呼吸急促等症状,部分严重的小鼠出现抽搐、休克现象,肝脏、胸腺、脾脏出现萎缩、变小的现象,且脏器指数下降。肝脏病理切片可观察到肝索紊乱、肝窦增大、细胞边缘不清晰、部分区域炎性细胞浸润。血液中白细胞(WBC)、淋巴细胞(LYM)、血红蛋白(HGB)、红细胞(RBC)和血小板(PLT)等指标水平发生显著改变(P0.05),且血清中ALT、AST、LDH及炎性细胞因子等水平显著升高(P0.05)。而鸡血藤总黄酮和阿米卡星处理可改善上述临床表现,抑制相关指标的改变,使其趋于与对照组相似水平。以上结果表明,鸡血藤总黄酮可通过提高机体免疫水平及抑制炎性反应减轻大肠杆菌败血症引起的机体损伤。     

金不换水提取物与抗菌药联合对含NDM-1不动杆菌的体外作用研究

本试验旨在探讨金不换水提取物与抗菌药联合对含新德里金属β-内酰胺酶-1 (New Delhi metallo-β-lactamase-1,NDM-1)基因不动杆菌传代的体外抑菌活性,为金不换的综合利用提供参考依据。试验采用二倍微量稀释法体外分别检测金不换水提取物与抗菌药对受试菌的最小抑菌浓度(MIC),并以亚抑菌浓度(即1/2 MIC)的金不换水提取物与抗菌药联合作用对含NDM-1不动杆菌进行传代。结果显示,金不换水提取物的MIC为0.25 g/mL,以0.125 g/mL的金不换水提取物与头孢曲松钠、阿莫西林、头孢噻肟、痢菌净、磺胺间甲氧嘧啶、头孢他啶、头孢噻呋钠、美罗培南8种抗菌药联合作用传代后MIC明显降低。综上所述,金不换水提取物部分联合抗菌药诱导耐药细菌体外抗菌活性明显增强,对含NDM-1的不动杆菌具有一定的抑菌作用。