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低转染效率一直是利用基因转染技术研究柔嫩艾美耳球虫的主要屏障。为了进一步提高现有的转染效率,本研究分别利用传统的Bio-Rad Gene Pulser电穿孔仪和新型的NucleofectorⅠ核转仪对柔嫩艾美耳球虫子孢子的转染条件进行了优化。通过对外源DNA浓度、电场强度、环境温度及NucleofectorⅠ核转仪的内置程序这些关键参数的探索,最终发现利用Bio-Rad Gene Pulser电穿孔仪设置电压为2000 V,电容25 μF,利用4 mm电击杯进行电转时,转染效率最高,达到3.8×10-4,此时最佳质粒浓度为50 μg/107子孢子。 相似文献
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刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生原虫,可以感染包括人在内的所有温血动物的有核细胞.如今,刚地弓形虫病已成为影响公共卫生的重要的人畜共患病:世界人群的刚地弓形虫慢性感染率约为25%,在法国和巴西,人的刚地弓形虫血清阳性率甚至高达75%~80%,我国各地人群弓形虫感染率从0.13%到47.13%不等.刚地弓形虫具备精密而复杂的细胞入侵、细胞内分裂和逸出机制.在这3个过程中,刚地弓形虫的各种蛋白质起着举足轻重的作用.因此,刚地弓形虫的蛋白质合成、分拣和分泌机制逐渐成为寄生虫学研究的热点之一.这些研究既可以更好的揭示刚地弓形虫的致病机理,又可以为其他寄生虫研究,如疟原虫,提供理论上的借鉴.本文主要阐述的是刚地弓形虫虫体内外蛋白质的分拣与分泌定位研究进展. 相似文献
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猪外周血T淋巴细胞增殖反应MTT检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
T细胞增殖反应是宿主T细胞识别病原的结果,也是宿主细胞免疫应答的重要指标之一。为了便于检测猪群在病原感染或者疫苗免疫过程中产生的细胞免疫应答,本研究应用MTT法建立了体外检测猪外周血T细胞增殖反应的研究方法。通过密度梯度离心法从外周血分离得到外周血单个核细胞(PBMC),然后利用单核细胞和淋巴细胞不同的生长特性(贴壁与否),弃掉贴壁的单核细胞,获得外周血淋巴细胞(PBL)。外周血淋巴细胞的流式分析结果显示,分离获得的PBL中T细胞所占比例达到了80%以上。应用MTT法分析了非特异性刺激物刀豆蛋白A(ConA)的浓度和细胞培养密度对T细胞增殖的影响。结果显示,ConA的工作浓度为5 μg/mL、细胞培养密度为2×106/mL时T细胞的增殖反应最强烈。本研究所建立的猪外周血T细胞增殖反应检测法可以为研究猪针对病原或疫苗的细胞免疫反应提供参考。 相似文献
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