中国美利奴绵羊55L9BAC克隆基因的筛选与序列的初步分析

利用绵羊55L9 BAC(细菌人造染色体)克隆制备探针,采用噬菌斑原位杂交方法,从中国美利奴细毛羊cDNA文库中筛选与免疫相关的基因,并对筛选得到的候选基因进行测序及软件分析.初步筛出12个候选阳性克隆.经过测序和比对,推测有8个独立的序列可能与绵羊的免疫及疾病相关,其中2个基因可以在已提交的BAC序列中定位.     

中国美利奴绵羊MHC ClassⅡb区349I12 BAC克隆插入片段基因组成与结构分析

利用已测序的中国美利奴绵羊细菌人工染色体(BAC)文库MHC区段阳性克隆插入片段制备探针,筛选中国美利奴绵羊(新疆军垦型)混合组织cDNA文库,以期获得该MHC片段的基因组成与结构信息。用中国美利奴绵羊MHC ClassⅡb区域内的349I12 BAC克隆,BsaJⅠ酶切后制备α-32P放射性探针,以噬菌斑原位杂交筛选正常中国美利奴绵羊cDNA文库,并将分离所得的cDNA阳性克隆测序后进行基因结构分析。以349I12 BAC克隆制备探针经过两轮的噬菌斑原位杂交筛选,获得19个cDNA阳性克隆,经测序、比对等进一步分析确定获得17条不同序列,其中7条序列与免疫相关。绵羊20号染色体上的MHC区段包含表达序列,且多为断裂基因,对其基因结构的分析将有助于相应基因功能及调控方面的研究。