化学修饰法制备B组轮状病毒生物素核酸探针及应用研究

用亚硫酸氢钠—乙二胺溶液对B组轮状病毒的ssRNA胞嘧啶修饰和转氨基作用，与生物素e—氨基己酸N—羟基琥珀酰亚胺酯反应，制备探针与样品在硝酸纤维膜上进行点杂交，经亲合素—碱性磷酸酶系统显色，可测出106.25－212.5pg的RNA靶序列，特异性试验表明：B组生物素探针只能与B组核酸杂交，而与无关核酸无杂交信号，用B组探针检测45份仔猪腹泻粪样，检出B组阳性5份，检出率11．1％，明显高于PAGE法，实验结果表明，生物素核酸探针制备简单并且有特异、灵敏、稳定的优点，可用于各组轮状病毒的检测。     

鸡源霉形体的分离和鉴定

对乌鲁木齐市2个大型鸡场鸡毒霉形体（Mycoplasma gallisepticum,MG）、滑液囊霉形体（M.synoviae,MS）感染情况用血清平板凝集试验（SPA）进行了血清抽样调查。结果表明，凝集抗体的阳性率分别为66.92%和35.90%，其中商品鸡场MG和MS的阳性率分别为82.50%和52.50%。从凝似MG、MS感染鸡的气管、肺、气囊、鼻裂和跗关节腔分离到19株分离物。经初步鉴定，分离物均为霉形体属成员。用生化和血清学及其他生物学方法，对这些分离物进行了鉴定。结果6株为MG，3株为MS，其余10株也属于霉形体。     

诊断B组轮状病毒的三种酶联免疫方法的建立

用从当地分离鉴定的山羊Ｂ组轮状病毒ＫＢ－６３毒株，在剥夺初乳的山羊羔体内传代繁殖病毒，制备抗原，建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）及生物素－亲和素系统酶联免疫吸附试验（ＢＡＢ－ＥＬＩＳＡ）。这三种方法经阻断试验、重复性试验以及交叉试验表明，其特异性、重复性好。以双盲法将此三种方法与对流免疫电泳法（ＣＩＥ）和聚丙烯酰胺凝胶电泳法（ＰＡＧＥ）作了对比研究，     

应用聚合酶链反应检测伪狂犬病病毒DNA

选用标准的伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）闽Ａ株，经ＢＨＫ２１细胞培养，提取ＰＲＶＤＮＡ作为摸板；合成１对２０－ｍｅｒ寡核苷酸作为引物；选择扩增序列由２６２个碱基对组成的位于编码多糖蛋白ｇｐ５０基因，用耐热的Ｔａｑ－ＤＮＡ聚合酶经３０个循环以后，扩增的产物直接用凝胶电泳检测，并用标准分子量确定。结果表明：以ＰＲＶＤＮＡ作为模板进行扩增，有扩增产物生成，以同科的疱疹病毒ＤＮＡ作为模板在相同的条件下进行ＰＣＲ扩增，无扩增产物生成，说明ＰＲＶＰＣＲ扩增是特异的。ＰＣＲ技术检测ＰＲＶＤＮＡ敏感度为２８．５ｐｇ．ＰＲＶＰＣＲ技术的建立，为伪狂犬病诊断和流行病学研究提供了更敏感、可靠的手段。     

山羊B组轮状病毒KB－63株动物感染实验

以山羊Ｂ组轮状病毒ＫＢ－６３株（本室分离鉴定）口服接种剥夺初乳的新生山羊羔、绵羊羔、犊牛以及仔猪。该毒株可在接种后１２～１７ｈ内引起山羊羔、绵羊羔，以及犊牛发生急性腹泻，并排出大量病毒，其核酸电泳图型及组抗原检测也与原接种病毒一致。当该毒株接种剥夺初乳仔猪时，不能引起仔猪腹泻也不排出病毒     

间接红细胞凝集试验在化脓棒状杆菌所致绵羊“肺脓肿病”诊断中应用的初步探讨

我们用化脓棒状杆菌反复冻融裂解制备的无菌体细胞抗原致敏的鞣化甲醛化和戊二醛化红细胞(在试验过程中发现甲醛化红细胞非特异性反应较戊二醛化红细胞为大,故在第2次试验及以后的试验中均采用致敏的戊二醛化红细胞)与从于田羊场疫群(“肺脓肿病”)羊中采回的绵羊血清(—20℃冰箱内保存)99份,健康羊群羊血清20份,免疫兔(化脓棒状杆菌菌体类毒素联合苗免疫)血清5份作间接血凝试验2次。发现疫群血凝抗体滴度分别在1:160—1:2560和0—5120之间(1:2560和1:5120以上稀释度来作测定),绝大多数羊(81.5％和83.19)血清学滴度在1:1280以上。接种疫苗2次并攻强毒后存活的兔免疫血清滴度均在1:1280以上(高于此水平的滴度未予测定)。90％健康羊血清滴度在1:40以下。看来本试验有高度的敏感性。试验过程中发现许多血清样品不同稀释度之间的凝集程度缺乏明显的差别,可能与非特异性凝集现象存在有关。为了消除这些现象作了四种稀释剂(0.2％明胶盐水、0.2％阿拉伯胶盐水、1:2500牛血清白蛋白盐水、1％兔血清盐水)消除非特异性作用的比较试验,发现以明胶和阿拉伯胶盐水消除非特异性凝集作用的效果最好,牛血清白蛋盐水次之,兔血清盐水最差。稀释剂以随用随配为宜,未用完的稀释剂即使在-20℃冰箱中保存,效果仍大大降低。根据本试验初步成果,我们建议在用间接血凝试验作化脓棒状杆菌病正式检疫时,判定标准可暂定为:血清抗体滴度1:20者为阳性,1:40者为可疑,1:80以上者为阳性。参照国外报导,Shigidi(1979)指出间接血凝在绵羊棒状杆菌传染的血清学诊断方法中具有胜过其他试验(试管凝集,凝胶扩散,抗溶血抑制、补体结合等试验)的优点。因之,本试验对化脓棒杆菌所致的肺脓肿的诊断在目前仍不失之为一种较好的血清学诊断方法。     

鳙、鲢鱼打印病病原菌的分离与鉴定

分离和鉴定了一株嗜水气单胞杆菌纯养物。该菌呈短棒状,无芽胞,极生单鞭毛,有运动力,革兰氏染色阴性。该菌可发酵多种碳水化合物如葡萄糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖、丙三醇等。在营养琼脂上生长迅速、良好,该菌对红霉素、氯霉素、7％氯化钠溶液等敏感,对青霉素和磺胺类药物有耐药性。根据这些特征,本菌不同于嗜水气单胞菌,不产气亚种和嗜水气单胞菌解朊亚种,被定为嗜水气单胞菌嗜水亚种。     

一株电泳型独特的猪B组轮状病毒的分离鉴定

１９８９年春，在新疆某猪场采集的仔猪腹泻粪样中，以ＰＡＧＥ法检出一株电泳型独特的非典型轮状病毒，其电泳型与Ｃｈａｓｅｙ等［１］报道的猪Ｅ组轮状病毒相似，该毒株样品口服接种剥夺初乳仔猪可在１２～１６ｈ后引起仔猪急性水样腹泻，并可在剥夺初乳仔猪体内稳定传代，但在用ＥＬＩＳＡ和ＣＩＥ法检测时发现该毒株不具有Ａ组轮状病毒组抗原，而具有Ｂ组轮状病毒组抗原．后用Ａ、Ｂ组轮状病毒全基因核酸探针斑点杂交检测，它与Ａ组探针无杂交信号，而与Ｂ组探针则有杂交信号。证明该毒株为一电泳型独特的仔猪Ｂ组轮状病毒．