哺乳动物卵母细胞冷冻保存研究进展

阐述了卵母细胞冷冻保存在核移植、体外受精、转基因生产及人类医疗等方面的意义,介绍了卵母细胞冷冻保存的方法、机理及冷冻保护剂的种类,论述了冷冻保存对卵母细胞发育的影响等问题。     

供体细胞的不同处理方法对牛核移植重构胚发育能力的影响

为了研究供体细胞不同的处理方法对核移植重构胚的作用，比较了用于保种的冻存和新鲜的成纤维细胞做供体细胞、供体细胞不同的离心转数、供体细胞不同的血清饥饿时间及用本实验室冻存的成纤维细胞，解冻复苏后，不同传代次数对重构胚的影响。结果表明分别用冷冻保存的和新鲜的成纤维细胞作为核供体，所得重构胚卵裂率、囊胚率无显著差（P>0.05）；供体细胞离心800 r/min时所得重构胚效果较好，离心1500 r/min所得重构胚的卵裂率、囊胚率与其他3组相比较低；血清饥饿3～5 d组所得重构胚比其他3组好；用解冻复苏后再传2、5代的细胞进行核移植，所得重构胚的卵裂率、囊胚率无明显差异(P>0.05)，显著高于传8代的细胞所得重构胚。说明供体细胞的不同处理方法对核移植重构胚发育有很重要的影响。     

HMG、EGF和TGF-α对猪卵母细胞体外成熟及发育的影响

以TCM199为基础培养基,HMG(尿促性素)为激素,探讨了HMG在猪卵母细胞体外成熟(IVM)和发育中的影响;同时对EGF(表皮生长因子)和TGF-α(转化生长因子-α)单独或联合使用对猪卵母细胞IVM及发育的影响进行了研究,以确立猪卵母细胞IVM较好的培养体系。结果表明:①在猪卵母细胞IVM中分别添加0.075、0.15、0.2、0.3 IU/mL的HMG,其中添加0.2 IU/mL的HMG组卵母细胞的成熟率和激活后的卵裂率显著高于其它组,差异显著(P<0.05);②添加50 ng/mL的EGF组成熟率和卵裂率高于对照组和添加30、40、60 ng/mL组,差异显著(P<0.05);③添加15 ng/mL的TGF-α组成熟率高于对照组和添加5、40ng/mL组,有显著差异(P<0.05),激活后卵裂率添加15 ng/mL组显著高于其他组(P<0.05),当TGF-α的浓度高于15 ng/mL后对卵母细胞的成熟和激活后的卵裂没有显著的提高作用;④同时添加EGF和TGF-α组成熟率和卵裂率与对照组相比差异显著(P<0.05),但与添加50 ng/mL EGF、15 ng/mLTGF-α组相比没有明显不同(P>O.05)。可见EGF和TGF-α对猪卵母细胞的IVM和激活后的卵裂没有明显的协同作用。     

醋酸铅对妊娠小鼠雌性后代受精和胚胎发育毒性研究

将妊娠小鼠随机分为高剂量 (1 / 1 0LD50 )、中剂量 (1 / 50LD50 )、低剂量 (1 / 2 50LD50 )和溶剂对照组。高、中、低剂量染毒组和对照组小鼠分别于妊娠的 9,1 1 ,1 3,1 5d和 1 7d腹腔注射 1 .2 g/mL ,0 .2 4g/mL和 0 .0 48g/mL的醋酸铅 [Pb(CH3COO) 2 ·3H2 O]溶液和灭菌蒸馏水 ,注射量 0 .0 1mL/ g。研究醋酸铅对染毒妊娠小鼠雌性后代生长发育和卵母细胞受精、受精卵卵裂及早期胚胎发育的影响。试验结果表明 :①各组后代母鼠断奶后体重变化规律类似 ,试验结束时各组小鼠平均体重无统计学差异(P >0 .0 5) ;②各染毒组后代母鼠受精卵比率极显著低于对照组 (P <0 .0 1 ) ;③染毒组后代母鼠早期胚胎发育受到显著影响 ,主要表现为回收胚胎中正常发育为囊胚的比例显著降低(P <0 .0 1 ) ,同时发育延迟胚及退化变性胚的综合比例显著升高 (P <0 .0 1 )。     

醋酸铅对妊娠小鼠雄性后代生殖毒性的研究

将妊娠母鼠随机分为高剂量(1／10LD50)、中剂量(1／50 LD50)、低剂量(1／250LD50)和溶剂对照组。高、中、低剂量染毒组和对照组母鼠分别于妊娠的9,11,13,15 d和17 d腹腔注射1.2,0.24,0.048 g／L的醋酸铅[Pb(CH3COO)2·3H20]溶液和灭茼蒸馏水0.01 mL／g。研究醋酸铅对妊娠小鼠雄性后代的生长发育和生殖能力的影响。试验结果表明:①高剂量染毒母鼠带仔行为受到醋酸铅的显著影响;②各试验组后代公鼠体重增长变化无统计学差异(P>0.05);③各试验组公鼠的睾丸、附睾湿重及其与体重的比值均无明显差异(P>0.05);④各染毒组后代公鼠精子相对密度显著低于对照组(P<0.01);⑤各染毒组后代公鼠精子活力与对照组之间无统计学差异(P>0.05);⑥高剂量和中剂量组后代公鼠精子畸形比率显著高于对照组(P<0.05),低剂量组则与对照组无统计学差异(P>0.05);⑦备染毒组后代公鼠精子顶体形态异常率与对照组之间无统计学差异(P>0.05)。     

哺乳动物精子质量检测原理及方法

人工授精和体外受精技术的不断发展，以及这些技术在生产实践中如各种濒危野生动物的拯救、哺乳动物繁育、人类不孕症的解决中的应用,使得精子质量评价方法也在不断改善。作者综述了精子的质膜完整性、顶体的状态、染色质状态、线粒体活性、精子DNA损伤检测以及受精能力等指标的检测原理及方法，以便准确预测精子的受精能力。     

影响卵母细胞体外成熟的因素

卵母细胞是胚胎工程技术研究中最为重要的一种试验材料,卵母细胞的体外成熟(maturation in vitro,IVM)可以为用体细胞核移植的方法生产大型转基因动物的研究提供大量MⅡ期卵母细胞，同样也是动物体外受精技术的关键环节。作者就卵母细胞体外成熟的影响因素做了简要的论述，主要介绍了卵母细胞来源、其培养系统、激素和生长因子等因素对卵母细胞体外成熟的影响。