不同部位皮下注射DNA疫苗对小鼠体液免疫的影响

主要探讨在小鼠不同部位皮下注射DNA疫苗对体液免疫应答的影响, 为DNA疫苗在体内获得高滴度抗体提供优化条件. 用RT-PCR从人肺癌细胞株A459中克隆VEGF片段, 并插入pVAX1质粒构建pVAX1-VEGF真核表达质粒; 在耳廓、胸部、腹部、尾跟部、背部及足垫的皮下注射1 μg/μL pVAX1-VEGF疫苗DNA 100 μL, ELISA法检测血清中VEGF抗原表达及其IgG抗体分布, 测定血清中IgG2a和IgG1两亚型水平. 实验结果发现: 耳廓、胸部、腹部免疫产生的VEGF抗原较快, 其中耳廓免疫产生的体液免疫最快最强, 与胸部、腹部、背部、尾根及足垫免疫产生的体液免疫反应相比, 具有统计学意义, 同时pVAX1-VEGF疫苗组与pVAX1对照组的体液免疫差异显著, 但pVAX1-VEGF疫苗组主要产生IgG2a型抗体. 上述结果表明: 所构建人VEGF的DNA疫苗能在小鼠体内有效表达, 不同部位皮下免疫后均能产生抗VEGF的IgG抗体, 以IgG2a抗体为主; 但就抗原表达、抗体及IgG2a而言, 以耳廓皮下接种最佳.     

利用等电聚焦技术鉴定杂交水稻种子纯度

等电聚焦电泳是分离蛋白质（同工酶）最有效的方法之一，本文以杂交水稻特优524（F1）及其父本、母本的种子为材料，对它们胚芽时期的酯酶等同工酶进行等电聚焦电泳分析。结果表明：特优524（F1）的酯酶同工酶有4条酶带，其父本有2条酶带，其母本有3条酶带，混杂种子有5条酶带。测出此杂交水稻种子的纯度为94．6％，与田间鉴定相符合。     

应用SSLP技术鉴定杂交水稻种子纯度的研究

种子纯度是种子质量控制中最棘手的问题,其检测方法从传统的形态法、蛋白质法等发展到利用各种分析标记鉴定种子纯度,SSLP技术目前在分子生物学研究中获得了广泛的重视,本文应用SSLP技术鉴定了5个杂交水稻组合的种子纯度并对SSLP技术在种子纯度鉴定中的应用前景进行了探讨。     

环氧合酶-2的DNA疫苗构建及其在COS-7细胞中表达

构建了环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2, COX-2)的DNA疫苗载体pVAX1-COX-2, 并考察在COS-7细胞中表达. 用RT-PCR法从肺癌A549细胞中获得环氧合酶-2基因片段, 此片段插入pVAX1载体构建pVAX1-COX-2真核重组表达质粒, 脂质体介导法转染COS-7细胞, 以pVAX1为对照, 收集稳定转染细胞, 利用RT-PCR和Western-blot分别在mRNA和蛋白水平上考察COX-2表达. 实验结果表明: RT-PCR法从A549细胞mRNA中扩增1.8 kb的COX-2基因片段, 酶切与测序结果表明所构建的真核表达载体pVAX1-COX-2与预期相符, 质脂体法成功地将质粒DNA转染到COS-7细胞中. RT-PCR和Western-blot分析结果表明COX-2已表达. 因此, 所构建的真核表达载体pVAX1-COX-2正确, 且在COS-7细胞中表达.     

黄瓜DNA提取及其RAPD-PCR反应体系的优化

利用改良的SDS方法提取黄瓜干种子与一步法提取的黄花苗总DNA进行RAPD扩增,其结果与传统的CTAB和SDS的结果一样.这两种方法不仅节约成本,且简单快速,大大降低了DNA的提取难度,适宜黄瓜杂交种子纯度鉴定.不同组织材料对RAPD无影响.研究了RAPD的影响因素,改进及优化了RAPD反应程序.结果表明:Mg2 浓度的范围为1.5～3.0mmol·L-1,dNTPs浓度范围为0.15～0.25mmol·L-1,Taq聚合酶浓度范围为0.5～1.5U,模板DNA浓度为20～100ng,反应以及引物浓度为0.2～0.4μmol·L-1.引物的碱基组成以及不同存放时间的引物对RAPD扩增也有影响.DNA预变性94℃进行4min,94℃变性30s,37℃退火30s,72℃延伸1min,循环35次后72℃再延伸7min.     

作物种子纯度常规检验方法及其评述

优良品种和高纯度种子不仅是作物高产的基础，而且是品种分级定价的依据。因此，本文旨在介绍作物品种鉴定和纯度分析的技术策略、研究进展、存在问题及改正措施。     

环氧合酶-2的DNA疫苗构建及其在COS-7细胞中表＊达

构建了环氧合酶-2（Cyclooxygenase-2,COX-2）的DNA疫苗载体pVAX1-COX-2,并考察在COS-7细胞中表达.用RT-PCR法从肺癌A549细胞中获得环氧合酶-2基因片段,此片段插入pVAX1载体构建pVAX1-COX-2真核重组表达质粒,脂质体介导法转染COS-7细胞,以pVAX1为对照,收集稳定转染细胞,利用RT-PCR和West-ern-blot分别在mRNA和蛋白水平上考察COX-2表达.实验结果表明：RT-PCR法从A549细胞mRNA中扩增1.8 kb的COX-2基因片段,酶切与测序结果表明所构建的真核表达载体pVAX1-COX-2与预期相符,质脂体法成功地将质粒DNA转染到COS-7细胞中.RT-PCR和Western-blot分析结果表明COX-2已表达.因此,所构建的真核表达载体pVAX1-COX-2正确,且在COS-7细胞中表达.     

植物遗传标记的发展及应用

从形态标记、染色体标记、生化标记及ＤＮＡ分子标记等方面较为系统地介绍了植物遗传标记的进展与应用现状。     

不同部位皮下注射DNA疫苗对小鼠体液免疫的影响

主要探讨在小鼠不同部位皮下注射DNA疫苗对体液免疫应答的影响,为DNA疫苗在体内获得高滴度抗体提供优化条件.用RT-PCR从人肺癌细胞株A459中克隆VEGF片段,并插入pVAX1质粒构建pVAX1-VEGF真核表达质粒;在耳廓、胸部、腹部、尾跟部、背部及足垫的皮下注射1μg/μL pVAX1-VEGF疫苗DNA 100μL,ELISA法检测血清中VEGF抗原表达及其IgG抗体分布,测定血清中IgG2a和IgG1两亚型水平.实验结果发现：耳廓、胸部、腹部免疫产生的VEGF抗原较快,其中耳廓免疫产生的体液免疫最快最强,与胸部、腹部、背部、尾根及足垫免疫产生的体液免疫反应相比,具有统计学意义,同时pVAX1-VEGF疫苗组与pVAX1对照组的体液免疫差异显著,但pVAX1-VEGF疫苗组主要产生IgG2a型抗体.上述结果表明：所构建人VEGF的DNA疫苗能在小鼠体内有效表达,不同部位皮下免疫后均能产生抗VEGF的IgG抗体,以IgG2a抗体为主;但就抗原表达、抗体及IgG2a而言,以耳廓皮下接种最佳.     

环加氧酶2基因的大肠杆菌表达与纯化

通过RT-PCR从肺癌细胞株A549克隆环氧化酶2（cyclooxygenase2,COX-2）基因全长1．8kb,测序结果与已发表的一致;将该片段插入pET32-a（＋）载体中,构建原核表达载体pET-32-COX-2,转入BL-21中,IPTG诱导重组融合蛋白his—COX-2表达,SDS-PAGE分析71kD处有特异条带,与理论相符;Western blotting验证为COX-2蛋白;用镍离子螯合柱（Ni—NTA）纯化融合蛋白,获得纯度较高的原核表达蛋白．为其新型抑制剂的研发与抗肿瘤作用蛋白疫苗的研制奠定基础．