绝对定量分析不同条锈病抗性小麦品种根际细菌群落结构

[目的]分析不同条锈病抗性小麦品种根际细菌群落的结构和功能差异,为开发防治小麦条锈病的环境友好方案提供理论基础和创新思路.[方法]以同一地块中对条锈病具有不同抗性的4个小麦品种(抗病品种贵农19和华麦1223,感病品种002和I19)为研究材料,采集不同抗性小麦品种根际土壤样品,采用绝对定量扩增子分析技术,研究抗病和感病小麦品种根际细菌的群落结构和功能.[结果]同一地块的4个小麦品种条锈病病情指数具有明显差异.4个小麦品种根际土壤细菌群落结构绝对定量分析表明,感病与抗病小麦品种的根际细菌群落分别聚类成独立的两类.感病小麦品种根际细菌群落丰度和多样性显著高于抗病小麦品种根际细菌群落(P<0.05).坐标分析(PCoA)表明,所有小麦品种根际细菌群落按照抗病性不同分为两组;细菌群落功能分析表明,抗病小麦品种根际细菌群落具有更多的氨基酸和抗生素分泌功能.[结论]条锈病抗性对小麦根际细菌群落的影响超过小麦不同品种间遗传变异的影响.通过分析和挖掘不同条锈病抗性小麦品种的根际细菌群落,可开发出环境友好的小麦条锈病生物防治菌剂.     

褐飞虱唾液分泌物中细菌多样性的初步分析

褐飞虱是我国水稻生产中的重要害虫,其唾液在取食过程中起着重要的作用。在笔者的前期研究中发现,褐飞虱在取食时会分泌凝胶状唾液和水溶性唾液。笔者收集了褐飞虱的水溶性唾液分泌物,通过建立16S ribosomal DNA(rDNA)文库检测了唾液分泌物中的微生物组成,共发现6种细菌,它们都属于变形菌门,其中属于γ变形菌亚门、β变形菌亚门的分别有4种、2种。此外研究还对褐飞虱取食后残留在水稻叶鞘中的口针鞘内部进行了透射电镜观察,发现在口针鞘内部和周围都有微生物的存在。研究结果可为进一步认识褐飞虱的取食行为以及褐飞虱体内的细菌型共生菌的生物学特性提供参考和依据。     

齿兰环斑病毒RdRp基因的原核表达及多克隆抗体制备

 采用RT-PCR法从感染齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus, ORSV)贵州分离物的苋色藜叶片中扩增出病毒的依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase, RdRp)基因保守序列。测序结果显示,该保守片段长516 bp,编码171个氨基酸残基。构建了该片段的原核表达载体pET32a-ORSV RdRp并转化BL21(DE3)菌株,在25℃以0.4 mmol·L^-1 IPTG诱导表达重组蛋白。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量约为36 kDa,与预测相符合。将该重组蛋白作为抗原免疫BABL/C小鼠,制备的多克隆抗体效价达1∶102 400。间接ELISA结果表明,该多抗具有较强的特异性,能检测到ORSV感染的病叶汁液中的RdRp,而与其它感染4种同属或不同属病毒的病叶汁液不发生血清学交叉反应,本实验为进一步研究RdRp的结构和功能以及从分子水平上探讨该病毒的致病机制奠定基础。     

高粱根质膜的纯化和膜蛋白的提取

利用高粱根作为实验材料,用不连续蔗糖密度梯度和Dextran T-500/PEG-3350两相法探讨了纯化质膜的过程,以及去垢剂对K+运输蛋白的增溶效率.结果表明,由6 mL 40%(W/W),4 mL 34%(W/W)和4 mL 22%(W/W)蔗糖组成的不连续蔗糖梯度,经80 000×g离心3 h后,在34%～40%界面处富含质膜.在质膜K+运输蛋白的增溶效果上,6.5 mmol/L CHAPS最为理想.     

建兰花叶病毒RdRp基因的原核表达及多克隆抗体制备

采用RT-PCR技术扩增出建兰花叶病毒贵州分离物(CyMV-GZ)的依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)基因保守序列。测序结果表明:该RdRp基因序列长735 bp,编码245个氨基酸残基。构建原核表达载体pET32a(+)-RdRp,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在37℃以0.3 mmol·L~(-1) IPTG诱导表达分子量约49 kDa重组蛋白。以该重组蛋白为抗原免疫小鼠,制备的抗体效价达1∶204 800。间接ELISA检测显示该多抗与CyMV病叶汁发生特异性免疫反应,而与其他6种同属或不同属病毒叶汁无血清学交叉反应。本实验为进一步研究RdRp的功能以及从分子水平上探讨该病毒的致病机制奠定了基础。     

产脂肪酶细菌的筛选及发酵培养条件的优化

为给扩大脂肪酶的生产源提供基础资料,对富含油脂的67份土壤样品进行了产脂肪酶细菌的筛选及目标菌株发酵培养条件的优化试验。结果表明:筛选分离出15株脂肪酶产生菌,经过对其发酵液脂肪酶活力的比较,菌株D9-1发酵液脂肪酶活力最高。目标菌株D9-1产脂肪酶最佳培养条件:最适氮源为1%蛋白胨,最适碳源为1%橄榄油,表面活性剂为1%OP-10,最适发酵温度30℃,摇床转速为170 r/min,发酵培养时间为24 h。     

茅台酒厂生态功能区优势植物的生理代谢及土壤理化性状

为阐明茅台酒厂生态功能区优势植物体内主要营养元素含量与土壤微生物及理化性质的关系,分别测定该地区优势植物根、茎和叶大量矿质元素含量、土壤微生物数量和土壤理化性质的相关指标,并分析其相关关系。结果表明:6种植物的根、茎和叶片中N、P、K、Ca和Mg的含量基本为叶片含量最高、根部含量最低。三叶鬼针草(Bidens pilosa)叶片中P、K、Ca和Mg含量最高,分别为2.35g/kg、22.93g/kg、31.80g/kg和9.81g/kg;复羽叶栾树(Koelreuteria bipinnata)叶片N含量最高(3.63%);3个样地中,上游土壤容重、土壤pH和土壤比重比中游和下游低,而有机质较则较高;中游土壤微生物总数最高,约为6×104个。相关分析表明,N、P、K、Ca、Mg含量均与土壤容重、pH、比重和放线菌呈正相关,土壤矿质元素含量与有机质和真菌数量呈负相关性。结论:该地区优势植物体内大量元素的含量受土壤理化性质和微生物的影响。     

建兰花叶病毒TGB1基因的原核表达及多克隆抗体制备

以GenBank中的CyMV-TGB1 (GenBank登录号:HQ681906.1)基因全序列设计1对特异性引物,采用RT-PCR从感染建兰花叶病毒的白花刺果曼陀罗叶片总RNA扩增出该病毒的TGB1基因.测序结果表明,该TGB1基因全长702 bp,编码233个氨基酸残基.构建了原核表达载体pET32a(+)-TGB1,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在25℃以1.0 mmol/L IPTG诱导表达重组蛋白基因.SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量约为44 ku,与预测相符.以该重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备的抗体效价达1:25 600.     

乙烯利对野生马缨杜鹃光合作用日变化的影响

研究了乙烯利对野生马缨杜鹃叶片光合作用日变化的影响。结果表明:喷施乙烯利后,马缨杜鹃光合作用的各参数的日变化趋势不变,但Pn、Tr、Ls、Gs和WUE均降低,而Ci升高。随着乙烯利浓度的提高,增强了其对Pn、Tr和WUE的效果,但对Gs、Ls和Ci影响不显著。     

白术种子萌发率快速测定方法及萌发适宜条件的研究

采用TTC法测定白术(Atractylodes macrocephala Koidz)种子的生活力,纸床法测定其发芽率,浸种法测定其吸水率,通过研究不同温度、浸种时间和光照时间对白术种子萌发的影响,探讨其萌发适宜条件。结果表明,白术种子的生活力与发芽率具有显著相关性,其相关系数r为0.970,回归方程为Y=0.856X-10.607。浸种12 h时,白术种子吸水达到饱和。白术种子萌发的适宜条件为浸种12 h、温度20~25℃、全黑暗培养。