家蚕是否有雌激素?雄蚕能不能生宝宝?——且看这两篇文章的分析

正家蚕属于卵生动物,卵生动物雌性第二性征开始的重要变化之一,就是卵黄原蛋白(Vitellogenin,Vg)等雌特异高量表达蛋白的合成。高等卵生动物的卵黄原蛋白对雌激素的响应是毋庸置疑的,虽然近年来又发现雌激素对许多软体动物和水生无脊椎动物Vg同样具有调控作用,但到目前为止,关于脊椎动物雌激素对昆虫卵黄原蛋白调控的研究并不多。卵黄原蛋白对家蚕来说究竟有多重要?雌激素对高等动物许多生理过程都具有显著的调     

家蚕卵黄原蛋白受体BmVgR的体外表达

【目的】克隆家蚕卵黄原蛋白受体（vitellogenin receptor, VgR）,分析其在昆虫细胞中的表达特征,了解正常VgR和突变VgR的表达模式,为阐明其生物学功能提供参考依据。【方法】基于家蚕VgR的基因编码序列设计特异引物,扩增的目的片段连接到载体pET28a上,构建原核表达载体,转化E. coil BL21（DE3）表达菌株,IPTG诱导获得目的蛋白;用镍柱亲和层析方法纯化诱导表达的家蚕VgR肽蛋白;将纯化后的肽蛋白制备BmVgR的兔源多克隆抗体;PCR扩增获得大造和突变型白妙卵（scanty vitellin,vit）的LBD1+EGF1结构域（C11D和C11V）片段,连接到细胞表达载体上,通过细胞转染表达目的蛋白,采用细胞免疫组化检测大造和突变型vit的VgR在细胞里的表达情况;通过Western blot检测细胞培养液中大造和突变型vit VgR的表达量。【结果】原核表达获得了一个大小约为22 kD的融合蛋白,以包涵体形式表达;镍柱亲和层析初纯化得到BmVgR的肽蛋白,进一步切胶纯化后,以此为抗原制备BmVgR的兔源多克隆抗体,其抗体效价＞1﹕512 000,纯度为95%以上。转录水平检测表明Sf9和Spli221昆虫细胞中没有BmVgR和BmVg内源基因的表达;在Sf9昆虫细胞中成功表达了家蚕野生型和突变型vit BmVgR的结构域SP+LBD1+EGF1肽段,家蚕突变型vit在BmVgR第1个表皮生长因子同源区域的第3个ClassB区域有编码50个氨基酸残基的核酸序列缺失;细胞免疫组化试验表明,突变型和正常型的C11V和C11D都能在Sf9细胞质中正常表达;制备的BmVgR兔源多克隆抗体和Myc标签抗体同时检测到细胞表达的目的蛋白,表明试验所制备的VgR抗体特异性较好;由于SP+LBD1+EGF1肽段存在信号肽,细胞表达的蛋白会分泌进入细胞培养液中,Western blot对培养液进行蛋白检测,表明突变型vit存在氨基酸缺失,但并不影响肽蛋白的正常表达,且表达量没有明显差异。【结论】EGF1结构域的缺失并不影响SP+LBD1+EGF1肽蛋白的正常表达,可能是其蛋白功能异常导致突变型vit表型产生。     

硫酸二乙酯对家蚕毒性的半致死剂量测定

硫酸二乙酯(DES)是一种能诱导生物体产生随机点突变的烷化剂。为了完善利用DES诱导家蚕突变的实验技术,采用不同剂量DES分别处理家蚕蛹、蛾、卵,检测DES对不同发育时期家蚕毒性的半致死剂量(LD50),结果表明DES对不同发育时期家蚕的LD50值存在显著差异:化蛹第5天的雌雄蛹分别为2 333.90μg/头和2 369.50μg/头;刚羽化雄蛾为156.39μg/头;蚕卵为13.23 mg/mL。研究结果可作为DES对家蚕的最适诱变剂量和家蚕诱变最佳发育时期选择的参考依据。     

N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)对家蚕毒性的半致死剂量调查

N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)是一种能诱导生物体产生随机点突变的烷化剂。为了完善利用MNU诱导家蚕突变的实验体系,用MNU处理家蚕品种大造的5龄第3天幼虫、化蛹第5天蛹、羽化当天的雄蛾及产后4～6 h的受精卵,通过Bliss法计算MNU对家蚕的半致死剂量(LD50)。结果显示MNU对不同发育时期家蚕的LD50值存在一定的差异:MNU对家蚕5龄第3天幼虫雌雄个体的LD50分别为28.735、20.157μg/头;对化蛹第5天蛹雌雄个体的LD50分别为56.466、54.672μg/头;对羽化当天的雄蛾的LD50为273.94μg/头;对产后4～6 h的受精卵的LD50为7 288.8μg/mL。实验数据表明,家蚕幼虫对MNU的毒性耐受能力差,蛾和卵的耐受能力较强;雌性个体对MNU毒性的耐受能力比雄性个体更强。