农抗SH—62产生菌原生质体再生菌株的筛选和再生菌株R-4发酵规律的初步研究

本文报道了农抗SH—62产生菌原生质体再生菌株的筛选和再生菌株R—4的发酵规律。试验表明,通过摇瓶的初筛和复筛,从活性比出发菌株要强的202株再生菌株中,找出R—4、R—66和R—72三株活性最强而又稳定的再生菌株。在再生菌株R—4的发酵试验中,选出了该菌株的最佳发酵培养基为1号培养基,并证明这个菌株对溶氧量并不敏感,在偏碱条件下有利于生长和产素,发酵周期为72小时等最适发酵条件。     

NTG诱发链霉菌5102获得营养缺陷型突变体的研究

营养缺陷型突变体不仅是作为遗传生化的研究对象,而且也是作为标准的基因标记而被广泛利用。因此,要开展抗生素产生菌的遗传学研究,首先必需要获得营养突变体作为材料。营养突变体的诱发可采用各种诱变剂,本实验是应用效果显著的化学诱变剂N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(NTG)对链霉菌5102进行诱变处理,然后筛选出各种不同标记的营养缺陷型突变体,并对营养型的分布作了分析。现将研究结果报告如下。     

泰乐菌素产生菌原生质体再生菌落的表型与产素能力的关系

在泰乐菌素产生菌的原生质体再生中出现有两种不同表型的菌落。一种菌落大,一种菌落小。活性测定结果表明,在185个大菌落中高落性菌株占20.5×10~(-3),而在179个小菌活中仅占1.7×10~(-2);但在小菌落中的无活菌株竟占86.6×10~(-2),大菌落中只占10.3×10~(-2)。说明菌落的表型与产素能力有明显的相关性。实验还表明UV诱变原生质体对形成的大菌落有良好效果,从中筛到一株产量超过出发菌株3倍以上的高产菌株。     

农抗5102产生菌原生质体融合育种的研究——Ⅱ影响原生质体融合的因素

用农抗5102产生菌的两株不同营养缺陷型突变体WNF-2-1-90和WNF-2-1一135所进行的原生质体融合条件试验。结果表明,1000、4000和6000三种分子量的PEG,各以30%、40%和50%的浓度加入两株突变体的混合原生质体悬液,其融合率达1.8-4.1%,比不加PEG的提高2-7倍;较佳的PEG浓度,则因其分子量不同而异,1000PEG的诱导效果随加入浓度升高而增大,余二者则相反。混合原生质体悬液在4℃和28℃中放置4小时后,其融合率几乎和加PEG的相近。融合前立即用UV照射混合原生质体悬液,其融合率比未照射的提高2倍以上。比较直接选择法和间接选择法检出融合子,表明间接法比直接法检出的要高1倍以上。     

吸水类群链霉菌的研究——Ⅰ.用扫描电子显微镜观察孢子丝和孢子形态

链霉菌的吸水类群是根据孢子成熟后,孢子堆自溶呈所谓“吸水现象”,使菌落表面形成褐黑、褐紫或黑色的粘性湿斑为唯一特征而建立起来的一个类群。这个类群所产生的抗生素类型比较多,特别是农用抗生素方面,如日本筛选的有效霉素,二重霉素,以及我国筛选的井冈霉素、农抗5102、内疗素等都是由这个类群的菌株所产生的,所以受到人们很大的重视。我们结合农用抗生素的筛选,将我室从教学和科研中逐年分离和累积起来的35株不同的吸水链霉菌进行系统研究。包括菌株的分类地位,抗菌范围和性能,素的类型等等。     

吸水类群链霉菌的研究 Ⅱ.一个新种的鉴别

从湖北省房县郊区土壤中分离到的SH-92菌株,具有链霉菌属吸水类群的特征。但在形态上比较特殊,与该类群的已知种都不相同,因此定为新种,命名为湖北吸水链霉菌(Streptomyceshubeihygroscopicus nov.sp.Zhou et a1.)。我们在寻找农用抗生素的过程中,分离获得了一些链霉菌属吸水类群的菌株,其中有SH-92菌株,形态比较特殊,经鉴别为一个新种。本文报道这个新种的鉴别性描述。     

农抗5102产生菌原生质体融合育种的研究——Ⅰ. 影响原生质体形成和再生的因素

本文报道了溶菌酶的浓度,酶解温度、时间,生长培养基成分和上再生培养基成分等因素对农抗5102产生菌两个营养缺陷型菌株的原生质体形成和再生的影响。实验结果表明:溶菌酶用量为4mg/ml时,合适的酶解温度和时间是32℃,1.5小时;生长在PM_1培养基和有机A培养基上的菌丝细胞壁对溶菌酶最敏感;原生质体不仅可以在高渗的RM_2培养基上形成菌落,而且也可以在非高渗的PM_1培养基上形成菌落;补充10%蔗糖的PM_1培养基上生长的菌丝可以增加对溶菌酶的敏感性和原生质体的再生频率;当原生质体在4℃中贮存24小时和48小时后,再生频率可分别下降达76%和和94%。     

吖啶橙处理吸水链霉菌应城变种获得丧失抗生素合成能力的阻遏突变株

通过活性测定和获得的阻遏突变株,进一步确证吸水链霉菌应城变种除了产生5102—Ⅰ号和5102—Ⅱ号抗生素外,尚能产生5102—Ⅲ号抗生素.采用吖啶橙处理这一菌株后获得的部分或全部抗生素生物合成能力受到阻遏的各种突变株,对进一步研究5102抗生素的生物合成途径和生物合成基因的克隆均有重要意义.关于这些阻遏突变株的获得,究竟是由于与生物合成能力有关的质粒被消除,还是由于诱变引起染色体突变所造成的结果,尚待进一步研究才能证实.