玉米大斑病菌和小斑病菌交配型多重PCR 检测方法的建立与应用

【目的】由大斑突脐蠕孢（Exserohilum turcicum）和玉蜀黍平脐蠕孢（Bipolaris maydis）引起的玉米大斑病和小斑病是玉米生产上重要的叶部真菌病害,本研究旨在建立玉米大斑病菌和小斑病菌交配型多重PCR检测方法,为玉米大斑病菌和小斑病菌的交配型田间分布和有性生殖研究提供技术方法。【方法】根据GenBank中已登录的玉米大斑病菌（登录号MAT1-1：GU997138和MAT1-2：GU997137）和小斑病菌（登录号MAT1-1：X68399和MAT1-2：X68398）交配型基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计2种病原菌交配型多重PCR检测特异性引物,采用单因素法对引物的退火温度以及扩增程序中延伸时间和循环数等重要参数进行优化,建立玉米大斑病菌和小斑病菌交配型多重PCR检测方法,并对2种病原菌的交配型多重PCR检测灵敏度和特异性进行检验。同时,对田间采集的129株玉米大斑病菌和194株玉米小斑病菌单孢菌株的交配型进行多重PCR检测,以明确建立的交配型多重PCR检测方法的适用性。【结果】建立的多重PCR方法和设计的交配型特异引物StMAT01-2F/R、StMAT02-3F/R、ChMAT01-3F/R和ChMAT02-2F/R可分别扩增出MAT1-1、MAT1-2型菌株大小为816、132 bp（大病斑菌）与490、136 bp（小病斑菌）的特异性目的条带。25 μL多重PCR扩增体系：2×Multiplex PCR Mix 12.5 μL,引物各10 pmol,DNA模板100 ng,退火温度为57.2℃（大病斑菌）和55.0℃（小斑病菌）,35个循环。该多重PCR对玉米大斑病菌MAT1-1、MAT1-2型单孢菌株的检测灵敏度分别为0.1、0.01 ng基因组DNA,而对玉米小斑病菌MAT1-1、MAT1-2交配型的检测灵敏度均为0.1 ng基因组DNA。该交配型多重PCR检测方法对玉米大斑病菌和小斑病菌特异性很强,能够很好地区分玉米大斑病菌和小斑病菌相应的近缘种和14株其他真菌菌株。不同地理来源的玉米大斑病菌和小斑病菌交配型检测结果表明,该多重PCR能够准确地检出129株玉米大斑病菌和194株玉米小斑病菌的交配型,且检测结果与随机抽取的菌株杂交验证结果完全吻合。【结论】构建的玉米大斑病菌和小斑病菌交配型多重PCR检测方法灵敏度高、特异性好、操作简便,能够准确、快速地检测出玉米大斑病菌和小斑病菌的交配型,为玉米大斑病菌和小斑病菌的交配型田间分布和监测及有性生殖研究提供了可靠的技术方法。     

建瓯市发展农村养殖小区和联户沼气的思考

结合建瓯农村实际,探索和创新养殖小区和联户沼气工程建设的农村沼气发展新模式,通过2 a的实践表明:与传统的户用沼气比较,养殖小区和联户沼气工程具有节约投资成本,有效解决沼气池建设土地,保障沼气发酵原料供给,便于维护维修和运行管理,改善农村生产生活环境等优势。     

沼渣在葡萄园施用肥效试验初报

文章于2017年在葡萄园开展加施沼渣试验示范,通过试验对比和测定表明:葡萄园施用沼渣土壤容重下降,有机质含量提高;葡萄的产量获得增长;果实的总糖、可溶性固形物含量提高,葡萄品质得到较大改善和提升,经济效益明显。     

农村户用沼气池管理及其综合利用技术

农村户用沼气是将能源、养殖和种植集合于一体的综合利用新技术,目前建瓯市农村户用沼气建设已初具区域规模,取得了较好的成效。现将其主要技术总结如下。     

浅析建瓯市农村大中型沼气建设工艺与要点

根据建瓯农村大中型沼气建设实践,详细介绍了农村大中型沼气建设内容、处理工艺和建设要求,以期为同行提供参考。     

油柰施用沼肥效应试验初报

在油柰上进行施用沼肥试验,结果表明:施用沼肥能提高土壤的速效养分含量,油柰的果实品质得到了较大改善,产量增幅达4.92%,每667 m2增收510.4元。     

建瓯市农村户用沼气发展对策

发展农村户用沼气是贯彻落实科学发展观,建设社会主义新农村的重要举措,有利于整治农村环境,保护森林资源,发展农村循环经济。在农村大力推进户用沼气建设     

柑橘园施用有机肥效应试验

商品有机肥和沼液在柑橘上施用试验表明,柑橘园的土壤容重下降、有机质含量提高;柑橘的产量获得增长,增幅达5.4%和4.9%;果实的总糖、可溶性固形物含量提高,总酸下降,品质得到较大改善;经济效益明显,667 m2产值增加358元和330元、增收133元和130元,产投比1.6∶1和1.5∶1。