鸡小肠原位单向灌流法和MDCK细胞系测定美托洛尔渗透性的影响因素

[目的]本试验旨在完善禽用药物生物药剂学分类系统(BCS)中药渗透性的准确测定方法。[方法]选取高渗透性内参药物美托洛尔,通过鸡小肠原位单向灌流法和体外过表达鸡P-gp的MDCK-chAbcb1单层细胞模型,探讨pH值(5、6和7)、药物浓度(4、40和400μg·mL~(-1))和小肠灌流部位(十二指肠、空肠和回肠)对美托洛尔渗透性测定的影响,为禽用药物BCS分类中渗透性测定方法的建立奠定基础。[结果]比较小肠不同部位在各自生理pH值条件下对美托洛尔的有效渗透系数(P_(eff))值时,发现回肠部位测得的P_(eff)最高(P0.01),分别为十二指肠和空肠部位测得的2.2倍和2.3倍;原位灌流试验结果显示,灌流液pH值升高会增强药物在回肠的P_(eff)值,pH7时的P_(eff)值(1.35×10~(-4) cm·s~(-1))显著高于pH5时(0.72×10~(-4) cm·s~(-1)),同样在MDCK细胞中,随着pH值升高,药物渗透系数(P_(app))值均极显著升高(P0.01);进一步采用受pH影响较小的空肠段进行灌流试验探讨不同药物浓度对渗透性测定的影响,发现增加肠灌流液中美托洛尔的浓度会极显著增加其P_(eff)值(P0.01),4、40和400μg·mL~(-1)美托洛尔的P_(eff)分别为-0.48×10~(-4)、0.27×10~(-4)和3.04×10~(-4) cm·s~(-1),且在MDCK和MDCK-chAbcb1细胞测定的结果也显示,40和400μg·mL~(-1)美托洛尔的P_(app)值均显著高于4μg·mL~(-1)的(P0.05),而40、400μg·mL~(-1)美托洛尔的P_(app)值间无显著差异(P0.05)。[结论]机体内环境的pH值、药物浓度以及小肠灌流部位均可以影响体内外试验模型中药物渗透性测定的结果,故在建立药物渗透性测定方法时应充分考虑这些因素。     

LPS对肉鸡空肠多药耐药相关蛋白2(MRP2)mRNA表达及其底物酮康唑小肠渗透性的影响

为了探讨脂多糖对肉鸡空肠中多药耐药相关蛋白2(MRP2)mRNA表达及转运功能的影响,采用荧光定量PCR方法检测脂多糖处理6 h和12 h后对健康肉鸡空肠组织中MRP2 mRNA表达的影响;采用小肠原位单向灌流试验测定了不同剂量脂多糖(5 mg/kg和15 mg/kg)对酮康唑空肠渗透性的影响。结果显示:经LPS处理6和12 h后,空肠中MRP2 mRNA的表达水平均极显著降低(P<0.01);鸡小肠原位单向灌流试验显示高浓度的脂多糖(15 mg/kg)能显著增加酮康唑在小肠的有效渗透率(Peff)(P<0.05)。试验表明,脂多糖能抑制肉鸡空肠组织中MRP2 mRNA的表达并对空肠的外排转运功能产生影响,从而促进其底物药物的小肠渗透性,进而可能会影响其体内生物利用度。该结果可为炎症状态下肉鸡的合理用药提供理论支持。     

槲皮素对鸡P-糖蛋白转运功能的影响

为了探讨槲皮素对鸡小肠P-糖蛋白(P-gp)转运功能的影响,选用槲皮素(10和50μmol/L)处理MDCK-ch Abcb1细胞系后分别进行美托洛尔和伊维菌素的双向转运试验;采用不同剂量的槲皮素(15和60 mg/kg)连续灌流5或10 d后进行美托洛尔的原位灌流试验,用60 mg/kg槲皮素处理试验组鸡10 d后进行伊维菌素的灌流试验。结果显示:10和50μmol/L槲皮素均能显著(P<0. 05)增强MDCK-chAbcb1细胞对美托洛尔的外排作用,外排率可从1. 89分别增至2. 95和2. 36,但均对MDCK细胞无显著影响(P>0. 05);灌流试验结果显示不同浓度的槲皮素均极显著降低美托洛尔的小肠有效渗透率(Peff)(P<0. 01),尤其低浓度槲皮素的作用更为显著; 60 mg/kg的槲皮素处理组虽能降低P-gp底物伊维菌素的Peff,但与对照组相比,差异不显著(P>0. 05)。结果表明:槲皮素在一定程度上会影响鸡P-gp的外排转运功能,在畜牧生产中使用时应注意考虑药物-饲料间相互作用,避免其对底物药物的体内过程产生影响。该结果可为临床制定合理的用药策略提供理论基础。